树脂半薄切片是一种以树脂作为支撑载体，经过取材固定、清洗、脱水、渗透、包埋、切片染色获得的组织切片，与石蜡切片相比，其厚度更薄（300nm-1um之间）、分辨率更高、染色不用脱树脂等特点。

 

LR White树脂是一种多羟基丙烯酸树脂，具有较高的亲水性，易于渗透和切片，对于染液的亲和性良好，广泛用于组织结构研究。

 

具体操作流程如下：

 

1、取材固定

 

选取观测目标位置，用双面刀片切取2mm左右的组织，于固定液中浸泡固定24h。固定完成后于4℃冰箱保存，待不同处理全部取样完毕后进行后续实验。

 

固定液可以采用2.5%戊二醛、4%多聚甲醛或者二者的混合液，对于不易渗透的组织，固定时可采用抽真空的方式加速固定液渗透。

 

2、脱水

 

脱水顾名思义，就是将组织中的水分去除，便于树脂渗透。脱水不彻底，树脂渗透受阻，组织结构受损，严重的在切片时就直接在水面上碎成粉末状；脱水过度会造成组织内含物抽提过度。不管是哪一种状态都对组织结构的保存不利。

 

具体操作流程：吸弃原有溶液，向离心管中分别加入30%-50%-70%-90%-100%-100%乙醇，每级脱水30min。

 

3、渗透

 

渗透是指采用树脂和乙醇的混合液以及纯树脂逐步将组织内的有机试剂取代成纯树脂。

 

具体操作流程：分别配置LR White树脂与乙醇的梯度混合液（30%、50%、70%）进行渗透，其中30%树脂1h-50%树脂3h-70%树脂5h-100%树脂5h两次。

 

4、聚合

 

将渗透好的组织调整方向后放入包埋模具中，于60℃烘箱聚合24h。

 

注意，在放置组织时可以采用牙签挑取，利用牙签尖端附着的微量树脂液滴，将组织包裹移动。尽量不要使用镊子，镊子夹取的力度不合适，会造成组织变性，从而影响结构。

 

5、切片

 

聚合好的组织，先用刀片将多余的树脂去掉，暴露组织后于切片机上进行切片。切片采用玻璃刀，切下的片子于水槽中展开，利用捞片环将切片捞起，置于载玻片上45℃烤干。

 

注意：玻璃刀需要用玻璃刀制刀机进行制备，制备好的玻璃刀粘上水槽后即可进行切片，玻璃刀制备的状态会影响切片效果（褶皱、刀痕、卷曲等）。

 

6、染色镜检

 

染色时先将载玻片置于烤片机上进行预热（45℃），根据实验需求选取不同的染液进行染色即可。切好的片子可以统一放置在切片盒中，待所有实验组织都切完后进行统一染色。

 

本文以甲苯胺蓝为例：滴加1%甲苯胺蓝5ul，于烤片机上进行恒温染色，待染液液滴周围出现金色环带后，用蒸馏水清洗掉多余染液，于烤片机上烤干后镜检。

来源：实验老司机

关键词： 树脂 切片