现在的细胞培养耗材大多数已经采用了一次性提前灭菌和处理过的塑料，好处是不用清洗，用完就可以扔了。

 

1、 耗材的清洁

要清洗的通常是玻璃、金属材质的工具，例如装缓冲液的玻璃瓶、过滤用的较大尺寸的适配器，因为要反复多次使用，所以需要在使用完后清洁和灭菌。

以我之前所在的实验室为例，用完的玻璃器皿需要先泡酸，过夜后取出，在自来水下冲洗掉酸之后，加清洁剂并用刷子里里外外刷干净，清洁剂不能加多，不然泡沫太多看不清是否有污渍残留。

完事之后再用自来水冲洗13-15次，接着用三级纯水或蒸馏水冲洗1-2次，最后再用二级或一级纯水冲1次，完成后拿去烘干，最后才是灭菌。金属材质的器皿则直接从使用清洁剂清洁开始，不需要泡酸。

 

2、 耗材的灭菌&过滤除菌

在培养过程中，所有要接触的设备、耗材、液体都要确保无菌，除菌的方法取决于该物品在高温下的稳定性。

可耐高温的，例如金属、玻璃或PTFE材质的塑料，可以用干热灭菌或蒸汽灭菌，耐高温的液体用蒸汽灭菌，对温度敏感的塑料可以用乙醇处理，对温度敏感的液体依靠过滤除菌。

上述除菌方式，大家接触最多的应该是蒸汽灭菌和过滤除菌。蒸汽灭菌依靠的是高压灭菌锅，在压力100kPa、121摄氏度、20分钟的反应条件下，完成灭菌过程。

 

灭菌锅的操作比较简单，大家要注意的有几点：

1、 待灭菌的物品，如果是玻璃瓶并装了液体，灭菌前要拧松盖子，不然可能会爆炸，灭菌结束后，冷却完之后再拧紧盖子；

2、 耐热的液体可以蒸汽灭菌，例如琼脂培养基、甘油、PBS；不耐热的不能用这种方法，例如氨基酸、抗生素、蛋白或酶；

3、 蒸汽灭菌会产生水蒸气的渗透，因此如果是塑料耗材，例如装载吸头的盒子，要用纸包裹好以后再灭菌。

 

对于上述提到的第2点，不耐热的液体，我们可以依靠过滤除菌。

最常用到的工具就是这种针头滤器，它的过滤原理是正压过滤，滤器套在注射器顶部，依靠推压套筒产生的压力，把注射器内的液体推向滤器，然后透过滤膜，微生物截留在滤膜一侧，另一侧出来的液体就是无菌的。

 

使用针头滤器要注意2点：

1、 实验室的针头滤器滤膜有不同的材质，例如PES、PVDF、尼龙等，可以通过观察滤器外包装来确认，有的供应商会把滤器做成不同颜色，便于快速区分滤膜材质，例如默克的滤器颜色对应关系为：PES（绿）、PVDF（黄）、尼龙（紫）、PTFE（白）。

 

图片来源：https://images.app.goo.gl/P3Ab2u3wxXWiGJ2GA

 

为什么要了解滤膜材质呢，不同材质的滤膜适用于不同的实验，有的溶液只能使用特定滤膜过滤，例如DMSO，不能用PES和PVDF膜过滤，要用PTFE膜，否则会把滤膜溶解。

 

2、 滤膜的孔径尺寸分为0.22微米和0.45微米，如果是为了过滤除菌，要选择0.22微米的孔径。

另一种过滤原理是负压过滤，通常用于过滤大体积的溶液，例如培养基。

 

负压过滤要依靠真空抽滤装置，将瓶子内的气体抽走，造成一个负压，而瓶口连接着滤器，滤器内装有待过滤的液体，这些液体就会被大气压压向滤膜，过滤的液体直接储存在瓶子内。

 

像细胞培养中要用到的培养基，就可以通过这种方法来完成除菌，现在的培养基外包装有瓶装和粉剂，后者在配制好以后，就需要依靠负压过滤完成除菌，瓶装的则不需要。

不管正压还是负压过滤，滤膜的完整性是必须要关注的重要因素，如果滤膜破裂或穿孔，过滤除菌就无法实现。

 

如果判断滤膜是否还正常，可以做起泡点测试，具体操作如下：在过滤时，当所有液体都通过滤器以后，继续提高压力，此时滤膜的液体流出的那一侧会在某个压力下产生气泡，这个是起泡点。

 

通常这个点所对应的压力，是每款滤膜或针头滤器的说明书标注的“过滤压力”的2倍多，如果起泡点在灭菌压力（100kPa)时或更低时就出现，证明这个膜已经穿孔了。那么过滤的液体都要视为非无菌的液体。

来源：实验老司机

关键词： 细胞培养耗材 清洁 灭菌