生物指示剂是一类用于监测消毒、灭菌等处理过程效果的特殊工具，是指将适当载体染以一定量的特定微生物，用于指示消毒或灭菌效果的制品。它利用微生物对消毒、灭菌因子的抵抗力强于待处理物品上可能存在的自然微生物的特点，通过检测生物指示剂中微生物的存活情况，来判断消毒或灭菌过程是否达到预期效果。如果生物指示剂中的微生物被完全杀灭，那么可以认为待处理物品上的自然微生物也已被有效杀灭，消毒或灭菌过程是可靠的。

 

一、如何选择使用生物指示剂？

 

在医疗机构的灭菌生物监测中，WS310国家标准已明确规定：

 

1、压力蒸汽灭菌过程为每周一次，使用压力蒸汽灭菌生物指示剂；

 

2、环氧乙烷气体灭菌为每批次都要监测，使用环氧乙烷灭菌生物指示剂；

 

3、低温等离子体灭菌为每日监测一次，使用低温等离子体灭菌生物指示剂。

 

以上三种灭菌方式，也是2012年医疗机构的主要灭菌方式，其中，压力蒸汽灭菌使用最为广泛。

 

二、使用方法

 

放置：在灭菌前，将生物指示剂放置在被灭菌物品的内部或代表性位置，确保其能充分暴露于灭菌环境中。

 

灭菌处理：与被灭菌物品一起进行消毒或灭菌处理。

 

培养：灭菌处理后，将生物指示剂取出，放入适宜的培养条件下进行培养。不同的生物指示剂培养条件有所不同，一般细菌芽孢生物指示剂需在37℃或56℃下培养24小时至7天不等。

 

结果观察：根据指示系统的变化来判断结果。如颜色由紫色变为黄色，通常表示有微生物生长，灭菌失败；若颜色保持不变，则表明灭菌成功。也有些生物指示剂通过荧光等其他方式显示结果。

 

三、生物指示剂使用关键参数：

 

可使用市售的标准生物指示剂，也可使用有日常生产污染菌监控中分离的耐受性最强的微生物制备的孢子。在生物指示剂验证试验中，需确定孢子在实际灭菌条件下的D值，并测定孢子的纯度和数量。验证时，生物指示剂的微生物用量应比日常检出的微生物污染量大，耐受性强，以保证灭菌程序有更大的安全性。因此，如下两个参数相当重要：单位重量芽孢含量及以D值。

 

 

四、执行生物指示剂挑战试验：证明所开发的灭菌程序实际达到了程序设计中确定的生物杀灭时间。

 

湿热灭菌生物指示剂挑战试验：

 

1. 选择恰当的生物指示剂系统。

 

在过度杀灭程序的确认中，循环结束F0>12，生物指示剂的D121℃应大于1。常采用生物指示剂是嗜热脂肪芽孢杆菌等。

 

在采用“残存概率法”设计的灭菌程序的确认中，生物指示剂的耐热性应大于产品的生物负荷的耐热性。且需结合生物负荷历史数据，留有一定的安全系数。典型的生物指示剂包括：生梭芽孢杆菌、史密氏杆菌和枯草芽孢杆菌 5230。

 

考虑生物指示剂是悬浮在液体还是干燥在固体支持物上，因生物指示剂在不同介质中，其D值有很大差异。

 

2. 装载在不高于下限的灭菌条件下灭菌，灭菌温度的不高于下限，灭菌时间的不高于下限。

 

3. 灭菌结束后，将生物指示剂试验系统收回实验室，收回的生物指示剂应尽快测试，如不测试，应按要求储存。

 

4. 在适宜的介质和条件下，检查每个生物指示剂挑战试验的残存数。不同生物指示剂有不同的培养条件，包括培养温度、时间、环境、培养基等。

 

5. 对结果进行评价，以确保试验中孢子的对数下降值符合预定的要求，满足产品微生物存活概率 PNSU 小于10-6。

 

6. 生物指示剂挑战试验应作阳性对照，并确认接种部位生物指示剂数量足够，有没有其它干扰。

 

五、生物指示剂使用注意事项：

 

1：在最终灭菌法中，生物指示剂应放在灭菌柜的不同部位。并避免指示剂直接接触到被灭菌物品。生物指示剂按设定的条件灭菌后取出，分别置培养基中培养，确定生物指示剂中的孢子是否被完全杀灭。

 

2：过度杀灭产品灭菌验证一般不考虑微生物污染水平，可采用市售的生物指示剂。对灭菌手段耐受性差的产品，设计灭菌程序时，根据经验预计在该生产工艺中产品微生物污染的水平，选择生物指示剂的菌种和孢子数量。这类产品的无菌保证应通过监控每批灭菌前的微生物污染的数量、耐受性和灭菌程序验证所获得的数据进行评估。

 

 

来源：Internet

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