本研究旨在建立一种同时测定妇科养荣丸（主要成分为当归、川芎、杜仲、陈皮等）中绿原酸、京尼平苷酸、芍药苷、阿魏酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷含量的方法。采用的方法是通过甲醇提取液的分析，使用Eclipse XDB-C18色谱柱（450mm×4.6mm，5μm）进行分离；流动相为甲醇 -0.1%磷酸溶液，采用梯度洗脱；流速设定为1.0mL/min ；柱温保持在30℃ ；进样量为5μl；检测波长为230nm。结果显示，这6种成分在各自检测范围内均表现出良好的线性关系（相关系数r≥0.9995），平均加标回收率为98.71%，相对标准偏差（RSD）小于1.3%。因此，本研究所提出的分析方法准确可行，适用于妇科养荣丸（浓缩丸）的质量控制。

 

妇科养荣丸（浓缩丸）由当归、酒白芍、熟地黄等十六味药材制成，具有补养气血，疏肝解郁，祛瘀调经等功效。它主要用于治疗气血不足、血漏血崩，贫血身弱及不孕症 [1]。在临床上，妇科养荣制剂也常用于更年期功能性子宫出血、原发性卵巢功能不全、不孕症等疾病的联合治疗 [2-4]。原质量标准收录于《中药成方制剂》第十五册，该标准仅规定了显微鉴别；现收载于《中国药典》2020 版一部，增加了当归、川芎等薄层色谱鉴别，并对芍药苷含量进行了测定，规定每 1g 含白芍以芍药苷计，不得少于 0.80 mg。在质量标准中，检验项目单一化，难以全面把控制剂的整体质量。目前，关于芍药苷、橙皮苷等指标性成分评价妇科养荣丸（浓缩丸）质量的研究已有相关报道 [5-8]，但这些报道尚不够全面。通过资料检索发现，当归、川芎、白芍、杜仲等药材均具有相应的含量指标性成分。近年来，一测多评作为快速发展的中药质量控制方法，因具备科学、准确、应用范围广、可操作性强等优点，在传统中药复方制剂中得到了广泛应用 [9-18]。因此，本文采用高效液相色谱（HPLC）法对妇科养荣丸（浓缩丸）的质量进行研究，旨在为妇科养荣丸的整体质量控制提供科学参考。

 

1.材  料

 

1.1仪器

 

Agilent 1260 型高效液相色谱仪，配备DAD检测器（Agilent公司）；AUY220 型电子天平（精度达万分之一，日本岛津电子天平）；CPA225D 型电子天平（精度达十万分之一，德国赛多利斯）；以及 KQ-500VDE 三频数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

 

1.2试药

 

对照品包括：京尼平苷酸（批号111828-201805，纯度 98.1%）、绿原酸（批号 110753-202119，纯度 96.3%）、芍药苷（批号 110736-202145，纯度94.6%）、 松脂醇二葡萄糖苷（ 批号111537-201706，纯度 91.7%）、阿魏酸（批号 110773-201915，纯度 99.4%）以及橙皮苷（批号 110721-202019，纯度95.3%）。来源：中国食品药品检定研究院；妇科养荣丸 [仲景宛西制药股份有限公司，批号分别为 20031、20032、20033、20034、20035、20036，规格为每瓶200丸（每 8 丸相当于原生药3g）] ；实验中使用的溶剂为色谱级甲醇和超纯水，其他试剂均为分析级。

 

2.方法与结果

 

2.1色谱条件

 

色谱柱：Eclipse XDB-C18 柱（450 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇（A）与 0.1% 磷酸溶液（B）进行梯度洗脱；0-5 min，5%A；5-10 min，5%-15%A；10-17 min，15%-22%A；17-18 min，22%-25%A；18-25 min，25%A；25-28 min，25%-27.8%A；28-40 min，27.8%-32%A；40-55 min，32%-55%A；55-60 min，55%-90%A；60-70 min；90%A；波长为230 nm；柱温：30℃；流速为1.0 ml/min；进样量：5 μl。

 

2.2溶液制备

 

2.2.1 对照品溶液配制

取适量对照品，进行精密称定后，加甲醇溶解并摇匀，制得京尼平苷酸、绿原酸、芍药苷、松脂醇二葡萄糖苷、阿魏酸、橙皮苷的对照品贮备液，其质量浓度分别为 0.05480 mg/ml、0.16132 mg/ml、0.25840 mg/ml、0.07484 mg/ml、0.21876 mg/ml、0.56440 mg/ml。再取该贮备液 50 ml 置于 200 ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得对照品溶液。

 

2.2.2 供试品溶液制备

 

取本品细粉 1g，置于 25ml 量瓶中，加入适量甲醇，超声处理 30min后放冷，再用甲醇定容至刻度，充分振摇，滤过，取续滤液，经 0.45μm 滤头过滤，即得。

 

2.2.3 阴性样品溶液制备

 

取缺当归（含绿原酸、阿魏酸）、酒白芍（芍药苷）、川芎（阿魏酸）、杜仲（松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸）、陈皮（橙皮苷）的剩余药材，按照处方及工艺制备阴性样品，再按照“2.2.2”项下方法制备阴性样品溶液。

 

2.3一测多评法测定各成分含量

 

2.3.1 专属性实验

 

精密吸取上述阴性样品溶液、对照品溶液及供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样，记录色谱图，见图1。结果显示，各成分有效分离且阴性对照无干扰，表明该方法专属性良好。

 

图1 高效液相色谱图

 

2.3.2 线性关系考察

 

将对照品稀释成 6 个不同浓度，分别取 5 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定。以C质量浓度为横坐标（X， mg/ml）、S 峰面积为纵坐标（Y），进行回归分析，结果见表1。各成分在各自范围内线性关系良好。

 

表1 各成分线性关系

 

2.3.3 精密度试验

 

取对照品溶液 1 ml，按照“2.1”项下色谱条件重复进样 6 次。计算六种成分的峰面积 RSD 分别为 0.29%、0.82%、0.50%、0.86%、1.08%、0.18%，表明仪器精密度良好。

 

2.3.4 重复性试验

 

取批号为 20031 的样品，按“2.2.2”项下方法制备 6 份，以“2.1”项色谱条件进样测定，计算各成分含量 RSD分别为 0.62%、1.51%、0.82%、1.32%、1.40%、0.58%，表明该方法重复性良好。

 

2.3.5 稳定性试验

 

取同一样品溶液，在 0、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 时分别进样，测定绿原酸、京尼平苷酸、芍药苷、阿魏酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷的峰面积 , 计算 RSD分别为 1.14%、0.90%、1.27%、0.79%、1.10%、0.84%，表明溶液在 12 h 内稳定性良好。

 

2.3.6 加样回收率试验

 

取批号为 20031 的样品，研细后取 6 份，每份约 0.5 g，置 25 ml 容量瓶中，加入对照品溶液 10 ml，加甲醇适量，超声处理 30 min，冷却后加甲醇至刻度，摇匀，滤过，按“2.1”项色谱条件进样测定，计算回收率分别为97.77%、98.73%、99.26%、99.35%、98.27%、98.85%，RSD 分别为 1.21%、1.24%、0.88%、0.97%、1.04%、1.17%。

 

2.3.7 样品含量测定

 

取 6 批样品，按“2.2.2”项下方法制备，按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果见表2。

 

表2 各成分含量测定结果（mg/g）

 

3.讨  论

 

3.1检测波长选择

 

由于中药方剂成分复杂，各成分的最大吸收波长不同，本实验在190 nm ～ 400 nm 范围内进行全波长扫描。结果显示，芍药苷、阿魏酸、绿原酸、橙皮苷、松脂醇二葡萄糖苷和京尼平苷酸分别在 230 nm、310 nm、327 nm、283 nm、277 nm 和 254 nm 处有最大吸收。但通过对比几种成分的全波长扫描结果，发现它们在 230 nm 处的峰面积减少较小。因此，选择在 230 nm 处记录色谱图，并进行 6 种成分的测定。

 

3.2流动相选择

 

本实验对比了乙腈 -0.1% 磷酸、甲醇 -0.1% 冰醋酸、甲醇 -0.1% 磷酸和甲醇 - 水作为流动相，不同成分的分离效果及峰形。结果显示，甲醇 -0.1% 磷酸作为流动相时分离效果及峰形最佳。由于样品成分复杂且各有效成分保留时间长短不一，经反复实验确定采用梯度洗脱方式进样，以实现各成分的有效分离。

 

3.3提取方法

 

参考《中国药典》中样品的处理方法，本实验分别采用了加热回流和超声波处理两种方法进行研究。研究发 现， 不 同 超 声 提 取 时 间（30 min、45 min、60 min）提取率差异不明显，30 min 时各成分已能有效提取；加热回流（30 min、60 min）的提取效果与超声提取的差异不大。为简化操作，选择超声波提取作为样品处理方法。此外，通过改变不同提取溶剂发现，甲醇作溶剂时橙皮苷提取率最高，而使用含水的有机溶剂作为提取溶剂时，橙皮苷的损失较为明显。而其他几种成分受提取溶剂变化影响较小。

 

4.结  论

 

本文对妇科养荣丸（浓缩丸）中的 4 种药材 6 个指标成分进行了定量分析，为该药品的整体质量控制提供了科学依据，使整体质量控制更加全面和合理，具有重要的参考价值。

 

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本文作者李磊1、张强1、景廷杰1、陈玉海1,2，1.仲景宛西制药股份有限公司、2.河南省中药固体制剂技术创新中心，李磊为本文第一作者，从事中药生产质量控制与研发，担任仲景宛西制药股份有限公司提取车间主任，仅供交流学习。

来源：制药工艺与装备

关键词： 妇科养荣丸