【问】对于生物指示剂的实验室管理有哪些要求?

 

【答】1、生物指示剂接收、储存接收时应确认运输条件、包装、数量等符合要求，并附带有厂家检验报告，报告内容一般包括微生物种类、含量、D值、有效期保存条件等。随后进行登记并按说明书在规定的贮存条件及有效期内存放，注意温度、湿度等保存要求。指示剂一般应保藏于受控的地点。

2、生物指示剂性能测试、放行生物指示剂的常规性能测试一般包括含菌量复核、纯度确认、形态鉴定。如果认为有必要，可以用表型法或基因法进行菌种鉴别(如在异常情况调查时)。外购的生物指示剂，当完全按照厂家的用途、使用说明使用时，无需进行D值测定，将供应商提供的D值数据作为该批指示剂的D值。《中国药典》指导原则9208生物指示剂耐受性检查法指导原则中，有详细的生物指示剂菌含量复核及D值测定的方法。在进行菌含量复核时，对载体的处理不当常导致菌含量复核结果偏低。如对于纸条式生物指示剂，因其不易打碎，可在液体中加入无菌的玻璃珠，然后再震荡打碎，制成纸浆悬液进行计数。其他载体的生物指示剂，可采用超声，使孢子尽可能从载体上脱落纯度确认可以通过在合适的平板培养基上检查孢子形成的菌落，确定是否有其他微生物污染。典型的微生物进厂质控(复核测试)报告包含以下内容：生产商、菌名、批号、标示含菌量、D值、效期、稀释过程、稀释倍数、计数结果、每个生物指示剂含菌量、是否合格等。可以将生物指示剂的厂家质检报告或其复印件与上述文件一起存放。检验合格的生物指示剂要经过批准和发放后才可以使用。领用时要登记领用人、日期、数量等。

3、生物指示剂培养

灭菌程序完成后,在规定的时间内(USP<55> Biologicallndicators-Resistance Performance Tests中规定不超过4小时)，将生物指示剂无菌转移至合适的培养基中并使其完全浸没在培养基中。对于带有孢子条的自含式生物指示剂，捏碎自带的培养基，使纸条完全浸没在培养基中。密封安瓿的自含式生物指示剂则直接在规定的条件下培养。某些类型的生物指示剂(如安瓿瓶装的沙土型干热指示剂)，在接种过程中操作不当，非常容易引发污染。此类型的生物指示剂在接种前尤其要注意生物指示剂外表面的消毒和检验员的手消毒。一般情况下，阳性对照生物指示剂在阳性间操作，灭菌处理后的生物指示剂在微生物限度区域操作。

培养温度:接种后按使用说明书的培养温度进行培养。

观察:在培养过程中定期观察，若已发现生物指示剂呈阳性，则记录结果，该阳性指示剂可停止培养，并进行相关调查。只有阴性指示剂需要培养整个培养周期。

培养时间:对于经典灭菌工艺(例如湿热灭菌、环氧乙烷灭菌)，其标准培养时间为7天;对于一个新型灭菌工艺，7天的培养时间是不充分的，需要基于验证来确定培养时间，建议至少培养14天。ISO 11138-8:2021《缩短生物指示剂培养时间的验证方法》中描述了缩短培养时间的方法，只适用于特定行业(如医院或者医疗保健机构)下和某些生物指示剂，并不适用于制药行业。

生孢梭菌或其他厌氧微生物用作生物指示剂时，要注意厌氧条件。

4、生物指示剂销毁

使用生物指示剂制造商推荐的方法或其他等效方法进行灭活处理后再销毁。

来源:药品GMP指南第2版质量控制实验室与物料系统(P277-278)

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