微生物限度检查方法

（以下内容仅供参考）

 

本企业经微生物限度检查方法中微生物计数及控制菌检查方法适用性试验，该产品可按以下方法进行微生物计数及控制菌检查：

 

1 供试液的制备：（根据自身产品特性及方法适用性试验结果，详细描述供试液的制备过程）

 

2 需氧菌总数测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用直接接种法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液1ml加至适量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，于30〜35℃培养5天，计数。结果以点计的菌落数×10报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜10报告菌数根据自身产品特性。

 

3 霉菌和酵母菌总数测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用直接接种法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液1mL加至适量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，于20〜25℃培养7天，计数。结果以点计的菌落数×10报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜10报告菌数。

 

4 金黄色葡萄球菌测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用常规法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液10mL，加至100mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，投入100mL胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18〜24小时。取上述培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上，30〜35℃培养18〜72小时。结果判断：若甘露醇氯化钠琼脂培养基平板上有黄色菌落或外周有黄色环的白色菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为金黄色葡萄球菌；若平板上没有与上述形态特征相符或疑似的菌落生长，或虽有相符或疑似的菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试液未检出金黄色葡萄球菌。

 

5 铜绿假单胞菌测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用常规法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液10mL，加至100mLpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，投入100mL胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18〜24小时。取上述培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，30〜35℃培养18〜72小时。取上述平板上生长的菌落进行氧化酶试验，将洁净滤纸片置于平皿内，用无菌玻璃棒取上述平板上生长的菌落涂于滤纸片上，滴加新配制的1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液，在30秒内若培养物呈粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳性，否则为阴性。结果判断：若溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上有菌落生长，且氧化酶试验阳性，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否为铜绿假单胞菌；若平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，且氧化酶试验阴性，判供试液未检出铜绿假单胞菌。

 

6 大肠埃希菌测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用常规法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液10mL，加至100mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，投入100mL胰酪大豆胨液体培养基中。30〜35℃培养18〜24小时。取上述培养物lmL接种至100mL麦康凯液体培养基中，42〜44℃培养24〜48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30〜35℃培养18〜72小时。

结果判断：麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。

 

7 白色念珠菌测定：根据自身产品特性及方法适用性试验结果选择适宜的方法，如采用常规法、薄膜过滤法等 ，以薄膜过滤法举例说明：先以少量pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液10mL，加至100mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，混匀，立即过滤。再以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，冲洗量每次100mL，冲洗后取出滤膜，接种至100ml的沙氏葡萄糖液体培养基中，混匀，30～35℃培养3～5天。取上述培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养24～48小时。若平板上有菌落生长，且呈乳白色或淡黄色，表面光滑有有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有褶皱；则挑取疑似菌落接种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～48小时（必要时延长至72小时），或采用其他适宜方法进一步鉴定。

 

若沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上有疑似菌落生长，且疑似菌在念珠菌显色培养基平板上生长的菌落呈阳性反应，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否为白色念珠菌；若沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或疑似菌在念珠菌显色培养基平板上生长的菌落呈阴性反应，判供试品未检出白色念珠菌。

 

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关键词： 中国药典 微生物限度检查方法