澄清度检测，作为大多数药物活性物质或者药物产品的必检项目，也是药品质量控制的重要组成部分，可以作为反应药品纯度的指标，在某些情况下，还可用于药物含量测定的手段。《中国药典》2025版通则0902虽相较于2020版有提升，但在具体执行时可能还是存在有疑惑的地方，故结合欧洲药典和美国药典中对于溶液澄清度或者浊度的相关规定，对澄清度的测定进行以下的理解。笔者认知有限，如有问题之处，也欢迎各位老师指出。

 

1.关于溶液澄清

在测定溶液的澄清度时，需要引入“浊度”的概念。浊度是由于亚显微粒子或光密度不均匀性导致光被吸收或散射的现象。如果溶液中没有任何颗粒或不均匀性，则我们可以说该溶液是澄清的。当采用特定的方法，将目标物与水或所用溶剂以及浊度标准液进行比较时，若目标物的浑浊程度与水或所用溶剂一致，或者不超过规定浊度标准液的浊度（中国药典是0.5号浊度标准液，欧洲药典是1号浊度标准液），就可以说其是澄清的。

 

2.澄清度检测方法

澄清度检查法主要是对其浊度进行对比，常见的方法有目视法和浊度仪法。目视法是通过将目标物和其溶剂或浊度标准液置于配套的同材质的容器中，在一定条件下目视进行对比测定。《中国药典》规定目视法无法判定两者之间的澄清度的差别的时候，可以改用浊度仪法或者其他方法测定。

浊度仪法根据原理不同，可以分为透射比浊分析（Turbidimetry，测量透射光）、散射测浑法（Nephelometry，测量散射光）和透射光－散射光比较测量模式（比率浊度模式）。

当从与入射光成直角方向观察悬浮液时，由于颗粒的散射作用，体系呈混浊态。进入混浊液体的光束有部分被透射、部分被吸收，其余部分被悬浮颗粒散射。悬浮颗粒的光散射效应可通过透射光（透射比浊）或直接测量散射光（散射测浑）进行评估。

上述两种模式在待测溶液的浊度较低时，测定结果更准确。此时浊度值与检测器信号呈线性关系。当浊度较高，溶液的颗粒物较多时，并非所有颗粒都能被入射光照射，其他颗粒所散射或透射的光在到达探测器的过程中也会受到阻碍。

当测定有色溶液时，因溶液颜色会对结果产生负干扰，削弱透射光的同时也会削弱散射光，从而降低浊度读数，即使是中等程度的颜色，也会对传统的散射光度计产生显著的影响，此时，就可以采用比率模式的设备来测定浊度消除颜色带来的影响，在比率模式中，通过测定透射光与90°的散射光之比来补偿颜色的影响。[颜色的干扰还可以选择发射波长为860nm、带宽为60nm的红外发光二极管（IR LED）作为光源来消除]

 

3.《中国药典》目视法

ChP中规定，采用目视法测定溶液的澄清度时，需将其在室温条件下将样品与等量的浊度标准液分别置于配对的比浊用玻璃管中，在浊度标准液配制5分钟后，在暗室内垂直置于伞棚灯下，照度为1000lx，从水平方向进行观察。测定时，直接进行比较，但查阅欧洲药典，可以发现其对目视法，也有测定样品前的系统适用性要求（光的散射应足以使1号浊度标准液与水容易区分，并使1号浊度标准液和2号浊度标准液容易区分）。为了检测结果的可靠性，建议在样品测定前，先观察水、1号和2号浊度标准液的浑浊情况。

 

4.《中国药典》浊度仪法

ChP中的浊度仪法采用的是散射光模式的浊度仪，比较适用于中和低浊度的无色供试品溶液的测定。

通常情况下，光源的峰值波长约为860nm；当测量范围在0.01~9.99NTU时，分别率应该为0.01NTU；当测量范围在10~100NTU时，分辨率应该为0.1NTU。当测量范围大于100NTU时，分辨率应为1NTU。（其中，NTU为散射浊度单位，基于福尔马肼浊度标准储备液的浊度值确定）

ChP中规定浊度仪的系统适用性需要定期考察仪器的线性和重复性。线性要求采用0.5号~4号浊度标准液的浓度与测定结果呈线性关系（相关系数不低于0.999）；重复性是取0.5号与4号浊度标准液，重复测定5次后，0.5号和1号的RSD≤5%，2~4号浊度标准液的RSD≤2%。

但除了上述常规的系统适用性要求，也需要考虑仪器测定的准确度，参照欧洲药典，当浊度测定值在0~20NTU范围内，测定值应该在真实值的±(10% + 0.01 NTU)范围内；在20~1100NTU范围内是，测定值应在真实值的±7.5%范围内。

杂散光是到达散射光检测器的，非样品散射所产生的干扰光（来源包括比色池缺陷、灰尘或者电子噪音等），其属于正干扰，也是低浊度测量中的显著误差的来源。故，我们在使用浊度仪测量时，也需要考虑对杂散光进行规定。当浊度在0~10NTU范围内，要求小于0.15NTU；在10~1100NTU范围内时，应小于0.5NTU。

 

5.浊度标准液的配制

ChP中提到了聚合物浊度标准液或福尔马肼浊度标准液，聚合物浊度标准液可以市售买到，配制得到的浊度标准液的保存时间较长[0.5号可在冷藏条件（2~8℃）下保存1个月，其余浓度的标准液可在室温下保存1个月使用]。但结合EP和USP，发现福尔马肼浊度标准液的认可度更高。

福尔马肼浊度标准液是目前唯一已知的一级（初级）浊度标准。它可以由试剂直接配制得到，但《中国药典》未对其试剂级别有明确规定，但采用各种级别的试剂，配制出来的结果会有一定的区别，可能无法满足配制出的浊度标准原液的浊度值为60NTU的要求。故我们查阅USP及相关文献[1]，对福尔马肼浊度标准液的配制进行了相应完善。

 

所有的操作步骤都必须在20℃±2℃的条件下进行。

（1）零浊度水：取水，经孔径为0.1μm（或0.2μm）微孔滤膜过滤2次以上或经纯水仪处理后，即得。

（2）硫酸肼溶液：取1.000g ACS级的硫酸肼（N₂H₄·H₂SO₄），置于100 mL A级容量瓶中，用零浊度水定容至刻度。将该溶液静置4–6小时。

（3）福尔马肼浊度标准贮备液：取2.50g的分析纯级的六亚甲基四胺（[(CH₂)₆N₄]），溶于25.0ml的零浊度水中，置于100ml量瓶中。再用25mL的A级“定量”移液管加入上述制备好的硫酸肼溶液25ml，充分混合。将混合液在25±1°C下静置48小时后再使用。所得储备液在2个月内稳定可用。

（4）浊度标准原液的制备：用一支15 mL的A级“定量”移液管，取15 mL福尔马肼浊度标准贮备液至1L容量瓶中，用零浊度水定容并稀释刻度，充分混匀。所得悬浮液的浊度为60NTU。该溶液应在48小时内使用。

（5）浊度标准液的制备：按照下表（表1）取规定量的浊度标准原液，分别置100ml量瓶中，加零浊度水稀释至刻度，摇匀，即得。应临用新制，使用前充分摇匀。

注：下表（表2）为ACS级硫酸肼的要求。

 

参考文献：

[1]Tyner, Tom, and James Francis. Hydrazine Sulfate. ACS Reagent Chemicals, Part 4: Monographs for Reagent Chemicals: General Descriptions, Specifications, and Tests. American Chemical Society, 2017.

[2]《中国药典》2025版四部通则0902澄清度检查法

[3]USP<855> NEPHELOMETRY AND TURBIDIMETRY

[4]EP 2.2.1Clarity and Degree of Opalescence of Liquid

 

来源：药事纵横

关键词： 澄清度 中国药典