【问】湿热灭菌微生物挑战性试验有哪些要求？

【答】热穿透测试数据只能确认温度，不能确认真实杀灭微生物的能力，微生物挑战试验可以为负载各位置具有同样的杀灭效率提供必要的证据，通常和热穿透测试同时进行。标定的生物指示剂也可用于 F₀ 的计算，并证实温度探头所获取的温度测试数据。

生物指示剂的耐热性应该比产品初始微生物的耐热性强。在过度杀灭法中，通常选择菌种 G.stearothermophilus（嗜热脂肪地芽孢杆菌）或其芽孢，也可采用其他对湿热灭菌耐热性强的微生物。在残存概率法中典型的生物指示剂包括：Clostridium sporogenes（生孢梭菌）、Bacillus smithii（史式芽孢杆菌）和 Bacillus subtilis（枯草芽孢杆菌）。

生物指示剂的耐热性和菌种浓度宜通过测试确认。特别是当生物指示剂所处的溶液或载体对生物指示剂的耐热性有影响时，例如葡萄糖溶液中、橡胶胶塞的表面（胶塞表面是多孔性材质，会导致微生物耐热性增加），应在验证试验中，对实际条件下生物指示剂的耐热性进行评估。

在微生物挑战试验中，生物指示剂可以放置在容器或包装内温度探头的测试点附近，灭菌后的生物指示剂通过复苏、相关的微生物测试程序，应证实灭菌程序可以实现低于 10⁻⁶ 的存活概率。

来源：药品GMP指南第2版无菌制剂

关键词： 湿热灭菌