HGC-27细胞是一种来源于人胃癌患者转移性淋巴结的低分化胃癌细胞系，具有较强的侵袭性和增殖能力，常用于研究胃癌的分子机制、药物筛选以及侵袭与转移特性分析。它在体外呈上皮样贴壁生长，呈多角形或短梭形，以单层形式生长。能够在免疫缺陷小鼠中形成移植瘤，是胃癌相关研究的重要模型。

 

培养方法：

 

培养基：RPMI-1640培养基+10%胎牛血清+1%青霉素链霉素双抗。

试剂耗材：无菌PBS、胰酶、移液枪、无菌枪头、细胞培养皿、离心管、离心机、生物安全柜、水浴锅、75%酒精。

培养条件：37℃、5% CO2的细胞培养箱。

 

一、细胞复苏

 

1、将水浴锅预热至37℃，从液氮罐中拿出细胞，放水浴锅中使细胞快速融化；

 

2、解冻后立即将细胞悬液转移至5mL离心管中，加入1mL预温的培养基稀释DMSO浓度。室温1000rpm离心5min；

 

3、离心完成后弃去含有DMSO的上清，用1mL新鲜培养基重悬细胞，之后接种至培养皿（根据细胞量的多少选择不同大小的培养皿）中，米字混匀后放入CO2培养箱中，24h观察细胞密度进行后续操作（换液或传代）。

 

二、细胞传代

 

每天观察细胞生长状态，确认是否达到适宜的传代密度（通常为70%-90%汇合度）。细胞过于密集会影响增殖活性，而过低密度可能导致细胞生长缓慢。

 

1. 吸掉旧培养基，加PBS轻轻润洗细胞1-2遍，清除残留的培养基；

 

2. 尽量吸干润洗的PBS后加适量的胰酶（如0.25% Trypsin-EDTA），摇晃使胰酶覆盖瓶底，置于37℃培养箱消化；

 

3. 显微镜下观察细胞，当细胞开始圆缩、脱离培养皿底时，立即加入含血清的培养基中和胰酶终止消化，轻轻吹打使细胞分散；

 

4. 将细胞悬液轻轻吸至离心管中，1000rpm，5min离心细胞；

 

6. 在新的培养皿中加入适量新鲜培养基；

 

7. 离心完成后，弃上清，加入1mL新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养皿中，米字法摇匀，然后放入CO2培养箱中继续培养。

 

三、细胞冻存

 

1. 配制冻存液，常用的冻存液为10%二甲基亚砜（DMSO）和90%胎牛血清（FBS）的混合液。DMSO作为保护剂可减少冰晶对细胞的损伤，FBS可为细胞提供营养和保护；

 

2、同细胞传代操作一致，将细胞消化后制成单细胞悬液，离心后弃去上清；

 

3、用冻存液重悬细胞，调整细胞浓度至1-5×10⁶/mL，轻轻混匀，避免气泡产生；

 

4、将细胞悬液分装至冻存管中（每管1mL）。使用程序降温盒（如Mr. Frosty），以每分钟约1°C的降温速度将细胞降温至-80°C（通常4-6h）；

 

5、初步降温后，将冻存管迅速转移至液氮罐中长期保存（-196°C），以保证细胞的长期活性。

 

注意事项

 

1、每2-3天更换培养基，避免废物积累或pH值波动。定期检查细胞形态和增殖情况，确保无细菌、真菌或支原体污染。

 

2、胰酶处理时间不可过长，以防止细胞受损。

 

3、HGC-27细胞推荐传代比例1:2至1:4。

 

4、冻存过程中需缓慢降温，复苏时需快速升温，减少温度波动对细胞的损伤。

 

5、复苏初期细胞状态可能较弱，避免频繁换液，通常24小时后首次更换培养基。

 

来源：实验老司机

关键词： 细胞培养