1. 概述

 

除了差速离心，实验室中分离生物材料还有密度梯度离心法。

 

此法又可以分为速率区带离心和等密度离心，都需要制备梯度材料，将待分离物加入梯度材料后通过一定离心力将不同生物颗粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带。

 

速率区带离心：仅能分离沉降系数差≤20%的颗粒或分子量相差能达到3倍的蛋白质。此法与颗粒密度无关。适用于分离密度相同而大小不同的物质。

 

等密度离心：此法通过梯度介质产生能够覆盖待分离物质密度范围的密度梯度，通过离心使不同密度的颗粒悬浮到相应的介质密度区。颗粒的密度是影响最终位置的唯一因素，只要被分离颗粒间的密度差异大于1%就可用此法分离。适用于分离大小接近而密度差异较大的物质。

 

因此我们可以发现，用来形成梯度的材料（介质）是离心成功的关键因素。以下将介绍如何选择梯度材料。

 

2 梯度材料的选择原则

 

理想的梯度材料最好能对以下几点优势进行一个我全都要，但这是不可能的，只能根据实验的目的、被分离材料和实验室条件等进行取舍：

 

是惰性材料，与被分离的生物材料不发生反应，且易与所分离的生物粒子分开；

 

可达到要求的密度范围，且在所要求的密度范围内具有较低的黏度和渗透压，离子强度和pH变化较小；

 

无毒，不会腐蚀离心设备；

 

容易纯化、价格便宜或容易回收；

 

浓度便于实验室内测定，如具有折光率；

 

其物理性质、热力学性质应该是已知的，稳定而不会因离心的条件与过程发生变化。

 

3. 常见梯度材料参考

 

 

参考文献：

[1] 张建社，褚武英，陈韬，2009，蛋白质分离与纯化技术，军事医学科学出版社

 

 

来源：实验老司机

关键词： 生物材料