在GMP和类GMP实验室中，分析检测设备需要以一定的频率进行再确认，特别是对于分析检测人员来说不可或缺的高效液相色谱仪，故结合JJG705-2014、OMCL (11) 04 、2023药品GMP指南和USP<1058> 的要求，拟定对于四元低压高效液相色谱仪的再确认操作规程。

 

1.目的

为了提供证明在仪器日常使用过程中，仪器本身或使用环境的变化（有意的或无意的）没有影响仪器的整体性能，确保分析数据的准确性，需要对仪器进行再确认。定期再确认通常重复初始确认过程中运行确认和性能确认的全部测试或部分测试。此规程对高效液相色谱仪确认各阶段具体实施提供了指南，注重其对预期用途的适用性。

 

2.适用范围

2.1 已经过确认的四元低压梯度高效液相色谱仪的周期性再确认（一般2年，但可根据实际情况提前或延后一个月，超过再检定时限的高效液相色谱仪将不可用于QC实验室检测）。已有高效液相色谱仪原来确认不充分时，要求进行的补充再确认。

 

2.2 已经过确认的四元低压梯度高效液相色谱仪发生变更后再确认。

 

2.2.1 经历重大维修，或更换关键部件。

 

2.2.2 仪器的安装地点需要变化。

 

2.2.3 软件或硬件升级。

 

2.3 已经过确认的四元低压梯度高效液相色谱仪根据定期回顾发现趋势性变化时（由偏差，数据超出标准或趋势分析引起），要求进行的再确认。

 

3.内容

3.1 概述

 

高效液相色谱仪是由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统等部分组成的分析仪器，图1是其组成的方框图。液相色谱仪根据样品中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附等特性的差异，由流动相将样品带入色谱柱中进行分离，经检测器检测并通过数据处理系统记录色谱图，依据各组分的保留时间和响应值（峰面积或峰高）进行定性和定量分析。

 

▲图1-高效液相色谱仪组成图

 

3.2 要求

 

高效液相色谱仪通常由输液系统、进样系统、分离系统和检测系统四个部分组成。输液系统主要对泵的性能进行确认；进样系统主要对进样准确度、进样残留进行确认；分离系统更多依靠色谱柱的分离效能，需对分析支持的柱温箱进行确认；检测系统中的核心组件在于检测器本身，需对检测器的响应系统进行确认。

 

3.3 输液系统-泵性能确认

 

3.3.1 泵流速确认

 

（1）可接受标准：.

（2）流速测定范围：0.3ml/min~2.0ml/min（0.3ml/min、0.5ml/min、1.0ml/min和2.0ml/min）

 

（3）测试方法：

 

以水为流动相，将流速设定在一个合适的水平，设置一定的时间段，将该时间段内收集的水置于事先称量过重量的量瓶中，每个流速水平下平行测定3次。记录量瓶的总重和测量时的温度。

 

（4）计算公式：

 

式中：

 

M总：接收液体后，量瓶总重，g；M空：接收液体前，量瓶重量，g

 

ρ：对应测定温度下，水的密度g/ml（可查阅中国药典得到）；f：测量的流速

 

V：收集的液体的体积；t：收集液体花费的时间

 

D＝100×(f－F)/F

 

式中：D：相对偏差；F：理论流速 

 

3.3.2 梯度确认

 

（1）可接受标准：偏差≤±2.0%。

 

（2）测试方法：

 

● 色谱条件： 

● 梯度程序设置：

● 操作步骤

 

A通道为空白相，B通道为丙酮溶液相，快冲A、B通道各5分钟，按条件平衡液相色谱仪，平衡稳定后，运行方法梯度，测试3次。

 

备注：为避免流动相在管路上形成气泡，超纯水和0.5%的丙酮水溶液需抽滤脱气；开始测试之前拆除“鬼峰柱”或“平衡色谱柱”，以免造成系统不适用。

 

（3）计算

 

采用工作站计算每个梯度相对于基线的高度。假设：100%的0.5%的丙酮溶液相的梯度高度为H，其他比例的丙酮溶液相的梯度高度为h，那么丙酮溶液相组成的测定值为：

梯度准确度的计算：d=CM-G，式中CM为测定值；G为设定值（0.5%丙酮=流动相B的组成）。

 

3.4 进样系统

 

3.4.1 进样精密度和进样残留

 

（1）可接受标准：

  （2） 测试方法

 

● 溶液配制： 

 

咖啡因STD溶液的配置：

 

● 确认方法条件：

 

 

 

● 进样序列：

 

 

（3） 计算

 

进样线性：计算各进样量时的平均峰面积与进样量的线性方程的相关系数。

 

精密度：计算标准品峰面积的RSD。

 

残留：计算空白溶液与相邻前一针STD-4峰面积的百分比

 

 

3.5 进样系统

 

3.5.1 柱温箱温度准确度和稳定性

 

（1）可接受标准

（2） 测试方法

 

● 测试范围

 

带降温功能柱温箱最低15℃、30℃、80℃；

 

● 准确度及稳定性测试操作过程

 

固定温度探头于柱温箱中，设置测定温度，等待30分钟，以便温度稳定。间隔5分钟记录一次，一共记录30分钟内（6次）的温度值。

 

（3） 计算

 

准确度：分别计算各个温度的偏差。

 

稳定性：6次记录温度的极值＝最大值－最小值。

 

3.6 检测系统

 

3.6.1 检测器波长准确度

 

（1）可接受标准

（2）测试方法

 

波长参数除外，参照4.4.1项下进样精密度确认及进样残留的检测方法采集STD-4溶液在202nm、203nm、204nm、205nm、206nm、207nm、208nm；242nm、243nm、244nm、245nm、246nm、247nm、248nm；270nm 、271nm 、272nm、 273nm 、274nm、275nm、276nm波长下咖啡因的峰高。计算其波长偏差。

 

（3）计算

 

以上波长为横坐标，以峰高为纵坐标绘制图片，最低点为为最低吸收波长，最高点为最大吸收波长。

 

3.6.2 检测器线性

 

（1）可接受标准

（2）测试方法

 

参照4.4.1项下进样精密度确认及进样残留的检测方法条件运行以下序列：

 

 

（3）计算

 

计算咖啡因溶液浓度与峰面积的线性方程的相关系数r值。

 

3.6.3 基线噪音及漂移

 

（1）可接受标准

（2）测试方法

 

● 确认方法条件：

● 操作过程

 

开启仪器，如上设置色谱条件，预热30分钟。

 

运行方法，采集30分钟信号。

 

（3）计算

 

计算0-30min的基线噪音及基线漂移（如有进样效应，前2分钟信号不参与计算）

 

3.7 设备确认工作流程

 

3.7.1 确认方案起草

 

设备确认执行人负责起草方案，包括目的、范围、内容、特别说明、人员职责、合格标准等内容。

 

3.7.2 确认方案审批

 

方案经过小组成员讨论确认后，提交给确认负责人签字确认后，再提交给有相关资质的人员审核，确认方案最终经质量管理部有资质的人员批准后方能生效。

 

3.7.3 对应方案的记录

 

在进行方案的讨论时，确定方法验证记录的模板，找QA确定记录编号后起草记录走审批流程。记录每次领用整套使用。记录由QA编号发放，不同记录按月编号发放，在记录首页盖上编号并在编号上加盖“受控文件”红印，整套记录加盖骑缝“受控文件”红印。

 

3.7.4 确认方案实施

 

确认小组负责人负责设备确认的组织工作，包括实施设备，收集记录、整理数据、出具报告和结论等工作的实施。

 

3.7.5 设备报告的整理

 

小组成员在实施验证/确认的工作中，准确及时填写记录，包括收集图谱、整理数据、出具报告结论等工作。

 

3.7.6 报告的审批

 

验证报告的结论经小组负责成员签字确认后，提交给设备负责人签字确认后，再提交给有相关资质的人员审核，确认报告最终经质量管理部有资质的人员批准后方能生效。

 

3.7.7 方案、记录和报告资料的归档

 

确认方案、记录和报告经质量管理部有资质的人员批准后交QA归档统一保管。

 

3.8 其他

 

3.8.1 根据再确认报告出具合格证标示，格式如下：

 

【参考文献】

 

JJG705-2014 液相色谱仪检定规程

 

OMCL Network of the Council of Europe QUALITY MANAGEMENT DOCUMENT PA/PH/OMCL (11) 04 ANNEX 1: QUALIFICATION OF HPLC EQUIPMENT

 

2023药品GMP指南：质量控制实验室与物料系统

 

USP<1058> Analytical Instrument Qualification

 

 

 

来源：注册圈

关键词： 高效液相色谱仪