近年来，有关食品添加剂的安全问题引起了企业与消费者的广泛关注，其中酸性橙Ⅱ被列为禁用物质，被严禁添加到食品中，因为酸性橙Ⅱ在偶氮还原酶的作用下会分解产生1-氨基-2-萘酚，这种物质具有严重的毒性。其次，酸性橙Ⅱ可能导致食物中毒，长期食用甚至可能致癌。此外，酸性橙Ⅱ还可能影响生育，例如导致不孕或畸形儿的发生。因此，监管机构应加强对食品生产和销售企业的监管，以确保公众健康不受危害。
然而，随着食品工业的快速发展，食品添加剂的使用难以避免且越来越广泛。食品用合成着色剂日落黄作为我国批准使用的食品添加剂，主要用于食品和药物的着色，也可用于制造铝盐色淀颜料，常用于果酱、固体饮料、复合调味料中。日落黄与酸性橙Ⅱ在结构上极其相似（见图1），日落黄是对氨基苯磺酸重氮化后与2-萘酚-6-磺酸偶合而得的；酸性橙Ⅱ是双氨基苯磺酸钠重氮化后与2-萘酚偶合、盐析而得的。而2-萘酚-6-磺酸又是由2-萘酚磺化而得的，如果生产日落黄的企业使用的原料2-萘酚-6-磺酸中含有2-萘酚，其日落黄产品中就极大可能含有酸性橙Ⅱ，然而日落黄生产厂家并未对出厂产品中酸性橙Ⅱ进行检测。因此，检测日落黄中的酸性橙Ⅱ是很有必要的，既是对日落黄生产企业负责，也是对消费者负责。
目前，食品中酸性橙Ⅱ的检测方法有高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法，但是食品用合成着色剂日落黄中的酸性橙Ⅱ检测还未有完善的方法。研究人员采用液相色谱法测定日落黄中酸性橙Ⅱ的含量，并辅以高效液相色谱-串联质谱法定性，可为日落黄中酸性橙Ⅱ的检测提供一种解决方案。
01试验方法
称取样品置于离心管中，准确加入水，涡旋，超声，过聚四氟乙烯滤膜，按照仪器工作条件测定。部分样品含量较高，需要稀释后测定。
02结果与讨论
2.1 质谱条件的优化
以酸性橙Ⅱ的相对分子质量为基础，在SIM扫描模式下，切换正离子（ESI+）、ESI−模式，结果显示，在 ESI−模式下酸性橙Ⅱ响应最高，进而获得酸性橙Ⅱ的母离子m/z和碎裂电压，并通过Product Ion（生成离子）获得子离子m/z和碰撞能量等。质谱方法用于在日落黄中酸性橙Ⅱ的定性分析，以防止液相色谱定量检测因处理方法简单而出现杂质干扰误判。
2.2 色谱条件的优化
日落黄作为工业产品，其合成工艺复杂，容易产生各种副产物，考虑到其可能存在很多杂质，试验对比了 ShimNex C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）和Agilent Poroshell EC-C18色谱柱（150mm×4.6mm，2.7μm）对目标物酸性橙Ⅱ的出峰时间及其与杂峰分离的情况。结果表明：酸性橙Ⅱ的出峰时间依次为15.01，14.69min，差别不大；酸性橙Ⅱ与杂质的分离度都大于1.5，都可以很好地分离。综合考虑，试验选择ShimNex C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）用于定量分析，Agilent Poroshell EC-C18色谱柱（150mm×4.6mm，2.7μm）用于定性分析。
样品溶液中酸性橙Ⅱ、日落黄和酸性橙Ⅱ混合标准使用液中日落黄和酸性橙Ⅱ的色谱图和光谱图见图2。日落黄与酸性橙Ⅱ能很好分离，样品中检出的酸性橙Ⅱ可通过其色谱峰光谱图与标准品光谱图对照，如果一致可判断出样品中可能含有酸性橙Ⅱ。
2.3 定量分析方法考察
2.3.1 线性参数、检出限和测定下限
按照色谱定量分析条件测定酸性橙Ⅱ标准溶液系列，以酸性橙Ⅱ的质量浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，酸性橙Ⅱ标准曲线的线性范围为0.02~20.0mg·L−1，线性回归方程为y=4.136×104x+2.830×102，相关系数为0.9999。
以信噪比 (S/N) 大于3计算方法检出限，以信噪比大于10计算方法测定下限，结果分别为0.001，0.005g·kg−1。
2.3.2 精密度和回收试验
按照试验方法对阴性日落黄样品进行4个浓度水平的加标回收试验，每个浓度水平测定6次，计算回收率和测定值的相对标准偏差（RSD），结果见表1。
由表1可知，酸性橙Ⅱ的回收率为91.9%~ 94.5%，测定值的RSD小于 5.0%，说明方法准确度和精密度良好，可应用于日落黄中酸性橙Ⅱ的检测。
2.4 定性分析
将经过液相色谱定量检测的样品提取液稀释至酸性橙Ⅱ的质量浓度为200μg·L−1，进而降低日落黄的相对浓度水平，对质谱仪器更加友好。在试验条件下测定酸性橙Ⅱ标准溶液和上述样品稀释溶液。若样品稀释溶液中检出色谱峰的保留时间与相应的酸性橙Ⅱ标准溶液色谱峰的保留时间一致，且样品稀释溶液的质谱离子对相对丰度与对应浓度水平的酸性橙Ⅱ标准溶液的质谱离子对相对丰度相比较，相对丰度的相对偏差符合国家标准GB 31656. 7— 2021《食品国家安全标准 水产品中氯硝柳胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》规定的范围（当相对丰度大于50% 时，允许的相对偏差绝对值为20%；当相对丰度为 [20%，50%] 时，允许的相对偏差绝对值为25%；当相对丰度为 (10%，20%) 时，允许的相对偏差绝对值为 30%；当相对丰度不大于10% 时，允许的相对偏差绝对值为 50%），则可判定日落黄中存在酸性橙Ⅱ。
2.5 样品分析
按照试验方法分析10批食品添加剂日落黄样品，测定其中酸性橙Ⅱ的含量，结果见表2。
由表2可知，10批样品中均检出酸性橙Ⅱ，检出量为0.26~8.46g·kg−1，还发现酸性橙Ⅱ的测定值与日落黄的纯度没有相关关系。
03试验结论
研究人员采用超声辅助溶解日落黄样品，用液相色谱法定量分析其中的酸性橙Ⅱ，同时辅以高效液相色谱-串联质谱法进行定性确证。方法能检测日落黄中的酸性橙Ⅱ，使得杂质与目标物分离度大于1.5，保证检测结果的准确度；辅以质谱法定性，能有效减小因为色谱分离不够或者存在峰包裹的情况出现假阳性的概率。方法前处理简单，可快速检测日落黄中酸性橙Ⅱ，可为日落黄中酸性橙Ⅱ的测定提供技术选择。
来源：理化检验化学分册
关键词：
液相色谱法
酸性橙Ⅱ
