小鼠皮肤组织与人类皮肤类似，分为表皮、真皮和皮下组织三层。表皮主要由角质形成细胞构成，起保护作用；真皮含有血管、神经、毛囊和腺体，提供营养支持和感觉功能；皮下组织主要由脂肪细胞组成，起缓冲和保温作用。小鼠皮肤组织常用于研究皮肤病、生物学过程和药物测试，因其结构和功能与人类皮肤有许多相似之处。

小鼠皮肤组织在科学研究中经常被用作研究模型，尤其是在皮肤生理学、病理学、再生医学和药理学等领域。通过研究小鼠皮肤组织中的蛋白质，可以深入了解皮肤的正常生理功能及其在疾病状态下的变化，为皮肤相关疾病的诊断和治疗提供理论基础。

 

一、实验步骤

 

1、组织收集与处理

 

使用麻醉剂将小鼠安乐死，按照实验动物伦理要求操作，用无菌器械取下所需的皮肤组织，尽量去除毛发和脂肪，将皮肤组织迅速放入液氮中速冻，然后储存在-80°C冰箱中，或直接进行下一步操作。

 

2、组织匀浆

 

将冷冻的皮肤组织置于预冷的PBS缓冲液中洗涤，去除血液和杂质，将组织放入预冷的匀浆器中，加入研磨珠，并加入适量的蛋白提取缓冲液（RIPA缓冲液），需加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂。

 

3、超声

 

将含有组织与裂解液的离心管置于超声破碎仪中。设置匀浆机参数：速度约为20,000 rpm，匀浆10-15次，每次5-10秒，中间间隔在冰上放置30秒。

 

4、离心

 

将匀浆的组织样本置于4°C下高速离心（通常为12,000至14,000 rpm，持续10-15分钟），以沉淀细胞碎片和未破裂的细胞。收集上清液，这部分含有可溶性蛋白质。

 

5、蛋白质定量

 

使用BCA法定量蛋白质浓度，以确保后续实验中的蛋白质量一致。

 

6、样品储存

 

将提取的蛋白质样品分装在小体积的离心管中，避免反复冻融。样品可以储存在-80°C以长期保存，或在-20°C下短期保存。

 

二、注意事项

 

1、确保全程操作在低温环境中进行，以减少蛋白质降解。

 

2、在进行蛋白提取时，组织细胞会释放内源性蛋白水解酶和磷酸酶，这些酶可能导致蛋白质降解或去磷酸化。因此，必须在蛋白提取缓冲液中预先加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂等，以保护蛋白质的完整性。

 

3、离心步骤要充分，以确保去除所有不溶性碎片，获得纯净的蛋白质提取物

 

4、使用液氮速冻样品时，先用锡纸进行包裹，再程序降温，防止研磨管爆裂。

 

 

 

来源：实验老司机

关键词： 蛋白提取实验