细胞在体外培养时大多呈现为单层贴壁生长，少量的细胞种类可以悬浮聚团成球生长。不管细胞啊以何种形式生长，我们都需要为其提供生长空间，常见的有培养瓶、培养皿、多孔板、搅拌瓶、多层培养瓶也称为细胞工厂。

 

1、 培养瓶

 

其中，培养瓶这种耗材，以材质来看，又分为玻璃和塑料两种。现在的实验室已经很少使用玻璃材质的培养瓶了，基本上是使用一次性的已灭菌塑料培养瓶，这种培养瓶的核心材料是聚丙乙烯。

 

我们在订购或使用前，常会遇到这个小细节，培养瓶是否经过表面处理，什么是表面处理呢？

 

因为聚丙乙烯本身是疏水性的，如果细胞要想贴在培养瓶内表面生长，就需要人工处理一下这个表面，让它带上电荷，这样细胞就能比较容易贴上去了。

 

所以，如果你要培养的细胞是贴壁生长的，需要选择经过表面处理的培养器皿，如果是悬浮生长的，则无所谓。

 

培养瓶、培养皿有大的也有小的，多孔板的孔数也有不同规格，要以什么为依据去选择培养耗材的类型，以及耗材的规格呢？

 

2、培养板

 

要看你培养细胞的目的。如果培养的细胞不需要特别多，但后续需要拿去做多次、重复的检测，要使用多孔板培养细胞，如果培养的细胞需求量较大，目的是为了练手、冻存细胞资源、或拿去做一些对细胞量要求特别多的实验，则建议用培养瓶和培养皿，新手的话优先选择培养瓶，更为安全。因为培养瓶的敞口比培养皿要小得多，污染的风险相对会更低。

 

如果希望单次培养的细胞产量能达到108的数量级，则建议使用多层培养瓶，也就是细胞工厂。如果细胞是悬浮生长的，且单次需求数量也达到上述的数量级，则建议使用搅拌瓶配合搅拌来培养。

 

这里有一张图表，是以HeLa细胞为例，计算其在不同类型、不同规格的培养器皿内的产量数量级。基本上，表面积越大，能产的细胞数量也越多，但其中并不是完全的线性关系，因为细胞的产量还和培养基的总量、氧气和二氧化碳的交换效率等因素有关。

从表里还可以看到，多孔板的规格是按孔的数量来划分的，孔越少，每个孔的培养面积越大；培养皿的规格是按皿的直径来划分的，直径越大，培养面积越大，培养瓶一般按培养面积的代号来划分，例如T25，代表培养面积是25cm2。

 

3、 其他耗材

 

细胞工厂由于是一个立体培养，所以规格既包括每层的培养面积也有层数，越多则细胞产量越大。搅拌瓶的标准主要是喷洒或非喷洒，意思是是否在培养时向内部喷洒5%的二氧化碳，因为当大量细胞在一个空间内生长时，不断搅拌+喷洒二氧化碳有利于促进细胞的生长，提高产量。

 

4、 经验总结

 

在使用培养瓶培养细胞时，还有一个细节需要注意，如果培养瓶盖是密闭不透气的，那么在放进培养箱时，应该把瓶盖拧松一圈，确保内部产生的过量二氧化碳能及时排出，培养箱内的二氧化碳也可以进入瓶内。

 

当然，如果瓶盖是透气设计的就最好了，这样直接拧紧即可，也不用担心污染问题。

 

在使用多孔板、培养皿时，最好能使用封口膜把盖子和皿或板的边缘封起来，因为这两种耗材的盖子是无法完全紧闭合上的，在培养过程中容易出现靠近边缘的部位或孔，因蒸发比中间位置更严重，而出现细胞生长不均匀的现象，其具体表现为边缘位置的细胞会长得比较慢，时间长了就造成中间的细胞密度高边缘的低。

来源：实验老司机

关键词： 细胞培养