透明质酸又称玻尿酸(英文缩写为HA),是一种以葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺为双糖单位交替连接而成的黏多糖。作为皮肤水嫩的重要基础物质,它本身也是人体的成分之一,它具有特殊的保水功能,吸水量可达其本身重量的100倍,是目前发现的自然界中保湿性最好的物质,被称为理想的天然保湿因子。能改善肌肤营养代谢,使肌肤柔嫩光滑,去皱,增加弹性,防止衰老,在保湿的同时又是一种很好的透皮吸收促进剂。以下小编将针对透明质酸的纯化方法做一介绍。

 

1.季铵盐纯化法

 

原理：HA在低盐浓度下与季铵盐结合形成不溶络合物，在高盐浓度下该络合物解离，释放出透明质酸，从而实现从发酵液中粗提HA。

案例及效果：甘肃省科学院生物研究所的方法包括透明质酸粗提、氯代十六烷基吡啶络合、透明质酸精提，最终发酵液废液中未检出透明质酸，回收率高达98%。上海佰加壹医药有限公司在络合沉淀阶段，让透明质酸钠与CPC、CTAB或CTAC充分络合，弃去上清液后，加水搅拌洗涤络合沉淀，重复洗涤1 - 5次再收集。其中使用CTAC络合沉淀，使透明质酸钠中杂质核酸的吸收度（A257nm）平均降低59.82%，蛋白质的吸收度（A280nm）平均降低54.25%，蛋白质含量平均降低75.52%。

 

2. 乙醇沉淀法

 

特点及应用方式：是从溶液中定量回收透明质酸的简单方法，但对工艺条件控制要求严格，常配合其他方法使用。

案例及效果：菲地亚有限公司用乙醇沉淀配合分子过滤纯化从公鸡冠中提取的HA，形成MW级分50 - 100kDa和MW级分500 - 730kDa的透明质酸，产物均不含炎性级分。费迪亚医药股份公司针对从公鸡冠获得的HA钠盐，先使其在乙醇中沉淀，随后进行加NaOH水溶液、HCl中和、过滤、沉淀洗涤、干燥等步骤，纯化得到的产物满足HA钠盐注射给药的所有要求，热原体内温度升高低于1.15℃，体外毒素低于0.05EU/mg，总蛋白含量低于0.1% ，易于后续制备注射产品。

 

3.过滤纯化法

 

原理及优势：通过过滤去除菌体和蛋白质等杂质，具有除杂方便、易于产业化的特点。

不同案例及操作：上海佰加壹医药有限公司用第一乙醇稀释透明质酸发酵液，经硅藻土和珍珠岩预涂的板框过滤得到滤液；滤液加第二乙醇沉淀，后续经络合、解离、第三乙醇沉淀、脱水干燥得透明质酸，该法使滤液浊度、蛋白等杂质含量大幅下降。其另一方法是先将硅藻土预铺于钛棒过滤器形成滤层，洗涤后，加入含透明质酸的酶解液或发酵液，经活性炭吸附后过滤，再醇沉、除菌过滤、真空干燥得样品，可增加助滤和吸附效果，降低细菌内毒素含量，降低成本。滨州安华生物工程有限公司采用活性炭、珍珠岩、白硅藻土、EDTA结合大板框过滤技术，将溶解后的料液多次过滤，最后通过乙醇醇沉干燥得到产物，杂质含量低，蛋白质≤0.1%，重金属≤20ppm，碘盐≤2ppm，产品纯度达99.0%以上。东辰控股集团有限公司和东营佛思特生物工程有限公司通过不同助滤剂和过滤装置进行4次过滤、脱色，透光率达标后沉淀制粉，制得透明质酸钠，生产周期可控制在60H，产品主要指标良好，收率可达95.65%。

 

4. 离子交换树脂法

 

原理：离子交换树脂含有能进行阳离子或阴离子交换的功能化基团，在水溶液中与透明质酸相互作用，实现纯化，且过程温和，不易引起透明质酸结构变化。

案例及操作：广东东阳光药业有限公司采用强碱阴离子交换树脂，对4% - 40%的透明质酸钠溶液，依次通过静态静置解析、搅拌静态解析、再生，分别得到不同分子量的透明质酸钠解析液。丘比株式会社使用阴离子交换树脂处理包含酸水解物的酸性溶液，为减少对树脂损害，可先加碱提高酸性溶液pH值，处理后可除去溶液中的阴离子，减少最终产物中相关元素含量。

 

 

来源：纯化大师

关键词： 透明质酸