摘 要：建立测定毒品中氟胺酮含量的高效液相色谱内标法。样品经称量、溶解、摇匀和过滤后，经Waters symmetry®C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱分析，以磷酸-三乙胺溶液和甲醇作为流动相进行等度洗脱（体积比为70∶30），检测波长为210 nm。氟胺酮的质量浓度在2～500 mg/L范围内与色谱峰面积线性关系良好，相关系数为0.999 9，检出限为1 mg/L，定量限为2 mg/L。低、中、高3个浓度水平的加标平均回收率为99.0%～102.2%，测定结果的相对标准偏差为0.71%～4.05%（n=6）。该方法分离效果和稳定性好，适用于固体毒品中氟胺酮的定量分析。

关键词：氟胺酮；高效液相色谱法；内标法；毒品

 

氟胺酮(F-Ketamine，2F-DCK)是一种苯环利啶类精神活性物质，由王世玉等[1]于1987年首次合成，2021年7月1日正式被列入《非药用类麻醉药品和精神药品管制品种增补目录》[2]。目前氟胺酮成瘾性机理尚未完全清楚[3‒4]，但其在毒品缴获物中的占比在不断增高。目前国内毒品缴获物中氟胺酮的定量分析方法主要有气相色谱法[5‒8]和核磁共振法[9]，在生物样品和环境样品中氟胺酮及其代谢物的检测方法主要为超高效液相色谱-质谱法[10‒14]。

目前液相色谱-质谱分析方法在毒品定量检测中应用较少，主要原因是样品浓度大，容易污染仪器，且使用成本远高于气相色谱法和液相色谱法等方法，因此在实际检测工作中往往不作为毒品定量分析的主流检测方法。气相色谱法分离效果好，但分析时间较长，在实际工作中，随着毒品样品量的不断增加，气相色谱法已无法满足大量样品定量分析的需求。液相色谱法具有分离效率高、选择性好、灵敏度高、分析速度快等优势，与气相色谱法相比，液相色谱法可应用于热不稳定、高沸点、离子型物质的检测，大大提高了样品检测范围。同时，液相色谱法是法医毒物分析领域中一项实用的检测技术，具有较高的灵敏度，可以显著降低检出限，以及具有更强的适用性而被广泛使用[15]。目前国内还未见采用高效液相色谱法测定毒品中氟胺酮含量的相关报道。为满足大量样品的快速分析需求，笔者建立了对毒品中氟胺酮定量分析的高效液相色谱内标法，可为涉及氟胺酮案件的检验鉴定提供可靠的定量方法。

 

1.实验部分

 

1.1主要仪器与试剂

高效液相色谱仪：Waters e2695型，配有2998 PDA检测器，美国沃特世科技有限公司。

电子天平：XSE105DU型，感量为0.01 mg，梅特勒-托利多国际贸易(上海)有限公司。

移液枪：10～100 μL、100～1 000 μL，法国吉尔森公司。

甲醇中氟胺酮溶液标准物质：1 000 μg/mL，上海原思标物科技有限公司。

色胺：纯度(质量分数)为97%，德国默克股份两合公司。

甲醇、三乙胺、浓磷酸：均为色谱纯，德国默克股份两合公司。

毒品样品、空白样品：均为送检样品。

实验室用水为超纯水。

1.2溶液配制

色胺溶液：称取色胺粉末51.55 mg，置于50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至标线，配制成质量浓度为1 000 μg/mL的色胺溶液，作为内标溶液。

氟胺酮系列标准工作溶液：分别精确量取氟胺酮标准溶液适量，均加入适量色胺溶液，用甲醇配制成氟胺酮的质量浓度分别为2、5、10、20、50、100、200、500 mg/L系列标准工作溶液，其中色胺的质量浓度均为50 mg/L。

磷酸-三乙胺缓冲溶液：准确量取3.50 mL浓磷酸，加入200 mL水稀释；准确量取6.10 mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中，用水稀释并定容至1 000 mL。

1.3仪器工作条件

色谱柱：Waters symmetry®C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm，美国沃特世科技有限公司)；流量：1 mL/min；进样体积：5 μL；柱温：35 ℃；检测波长：210 nm；运行时间：10 min；流动相：A相为磷酸-三乙胺缓冲溶液，B相为甲醇，A与B的体积比为70∶30；洗脱方式：等度洗脱。

1.4样品处理

将固体样品充分研磨，混匀，准确称取白色粉末状样品2份，各10.00 mg (精确至0.01 mg)，加入适量甲醇超声提取20 min，加入适量内标溶液，用甲醇定容至10 mL，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜，滤液作为样品溶液，其中内标色胺的质量浓度为50 mg/L。同法制备空白样品溶液。

1.5定量方法

在1.3仪器工作条件下，分别测定氟胺酮系列标准工作溶液和样品溶液，以氟胺酮与色胺的质量浓度比为横坐标，氟胺酮与色胺的色谱峰面积比为纵坐标，绘制标准工作曲线，用内标法计算样品中氟胺酮含量。

 

2.结果与讨论

 

2.1波长选择

在190～450 nm波长范围内对氟胺酮标准工作溶液进行扫描，光谱图如图1所示。由图1可以看出，在相同质量浓度下，色胺在219 nm处有最大吸收，氟胺酮在195 nm处有最大吸收，在216 nm处两种物质响应一致。为了尽可能获得较大的氟胺酮响应值，在216 nm的基础上适当降低检测波长，但由于190～210 nm波长属于低波段，受到样品杂质的干扰比较多，尤其是受到流动相中试剂纯度影响较大。为了排除杂质、溶剂等在低波长处的干扰，且保证氟胺酮在分析过程中的灵敏度，最终选择检测波长为210 nm。

图1氟胺酮和色胺的吸收光谱图

Fig. 1Absorption spectra of F-Ketamine and tryptamine

2.2流动相选择

分别考察了15 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含体积分数为0.2%的磷酸)-甲醇、磷酸-三乙胺-甲醇两种流动相体系在等度洗脱条件下对待测目标物保留时间、色谱峰型和分离度的影响。结果表明，以15 mmol/L磷酸二氢钠溶液(含体积分数为0.2%的磷酸)-甲醇作为流动相时，目标物不出峰；以磷酸-三乙胺-甲醇为流动相时，在等度洗脱条件下目标物能够有效分离。对该流动相体系配比进行优化，结果表明，当磷酸-三乙胺溶液与甲醇的体积比为70∶30时，目标物分离度大于2，故选择磷酸-三乙胺溶液与甲醇的体积比为70∶30作为流动相。

2.3柱温选择

采用磷酸-三乙胺溶液与甲醇(体积比为70∶30)为流动相，进行等度洗脱，考察柱温分别为25、30、35、40 ℃时目标物氟胺酮和内标色胺的色谱分离效果。结果表明，在不同柱温条件下，两种分析物随温度的升高分离度逐渐增大，且均大于2，可满足定量分析要求。此外，随着柱温的升高，两种分析物的保留时间减少1%～6%。当柱温为35 ℃时，两种分析物的色谱峰较窄，其峰宽比另外两种柱温条件小1%；当柱温为40 ℃时，两种分析物的色谱峰分离效果与柱温为35 ℃时的色谱峰分离效果相差不明显。综合考虑，最终将柱温设为35 ℃。

2.4专属性试验

在1.3仪器工作条件下，分别测定毒品样品溶液、空白毒品溶液、氟胺酮标准溶液和溶剂空白(甲醇)，色谱图如图2所示。由图2可以看出，空白溶剂和空白样品基质对2种分析物色谱峰无干扰，氟胺酮标准溶液和样品溶液中氟胺酮和色胺色谱峰均达到有效分离，且分离度大于2。表明该方法专属性良好，适用于色胺和氟胺酮两种分析物的检测要求。

图2毒品样品溶液、空白样品溶液、氟胺酮标准溶液和溶剂空白色谱图

Fig. 2Chromatograms of drug sample solution， blank sample solution， F-Ketamine standard solution， and solvent blank

 

2.5线性方程、检出限及定量限

在1.3仪器工作条件下，测定氟胺酮系列标准工作溶液，以目标物和内标质量浓度比为横坐标，目标物和内标的色谱峰面积比为纵坐标，绘制标准工作曲线，得到线性回归方程为y=0.448 19x-0.047 23，相关系数为0.999 9，质量浓度线性范围为2～500 mg/L。以甲醇为溶剂逐级稀释氟胺酮标准溶液，在1.3仪器工作条件下测定，分别以基线噪声的3倍和10倍作为氟胺酮的检出限与定量限，得检出限为1 mg/L，定量限为2 mg/L。

2.6加标回收与精密度试验

选择低、中、高3种质量浓度(2、20、200 mg/L)进行空白样品加标回收试验。按所建方法，每个加标水平平行测定6次，结果见表1。由表1可知，空白样品加标平均回收率为99.0%～102.2%，测定结果的相对标准偏差为0.61%～4.05%。表明该方法准确度和精密度均符合要求，适用于毒品中氟胺酮含量的测定。

表1样品加标回收与精密度试验结果

Tab. 1Results of sample spiked recovery and precision test

2.7稳定性试验

选择低、中、高3种质量浓度(2.0、20.0、200 mg/L)进行空白样品加标回收试验，在1.3仪器工作条件下，连续测定3日，每日测定6次，结果见表2。由表2可知，低、中、高3个加标水平测定结果的相对标准偏差为1.18%～5.21%，表明样品溶液在72 h内稳定性良好，满足毒品中氟胺酮含量的测定要求。

表2稳定性试验结果

Tab. 2Stability test results

 

3.结语

 

建立了高效液相色谱内标法测定毒品中氟胺酮的含量，分别对检测波长、流动相、柱温等条件进行了选择和优化。该方法简单、准确、精密度良好，为氟胺酮毒品的检验提供了方法参考。该方法主要针

对真实案例中的固体毒品样品进行检测，能否适用于其他非固体基质的样品还需进一步研究。

 

参考文献：

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引用本文：梁舒婷，蒙卫宁，吴明霞，等 . 高效液相色谱内标法测定毒品中氟胺酮［J］. 化学分析计量，2025，34（1）： 54.(LIANG Shuting, MENG Weining, WU Mingxia, et al. Determination of F-Ketamine in drugs by high performance liquid chromatography with internal standard method[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2025, 34(1): 54.)

 

 

来源：化学分析计量

关键词： 毒品 氟胺酮