临床前研究设施的管理应确保人员资质和培训、动物和样本处理、标准操作程序（SOP）、记录保存等，符合21 CFR第58部分的要求。尽管GLP法规最初是在动物药理学和毒理学研究的临床前研究中实施的，但进行临床研究的CRO也有义务在处理、分析或储存生物样本的医学和生物分析实验室中执行GLP原则。一般来说，所有生成数据的实验室设置，如果这些数据是新药临床试验（IND）提交的一部分，都必须遵守21 CFR第58部分。例如，涉及人类或动物样本（即体外或体内研究）的医学、诊断和生物分析研究实验室。此外，作为IND的一部分的毒性、遗传毒性和安全药理学研究等标准和重复给药研究也应符合GLP标准。

在对研究地点进行检查后，FDA会向临床研究地点的临床研究者或临床前研究的试验负责人（SD）发出483表，详细说明FDA调查人员的检查结果。随后，被检查的设施会启动纠正和预防措施（CAPA），并在书面回复中向FDA详细说明。如果测试设施的回复被FDA调查人员认为是不充分的，将发出警告信（WL），要求纠正所有与相应法规相关的违规行为以及检查团队提出的任何其他要求，并给予在15个工作日内或按要求的时间内回复的机会。

本文旨在评估过去六年间FDA向临床前研究设施发出的警告信（WL）的内容。强调FDA调查人员在警告信中列出的违规行为以及测试设施负责人实施的CAPA的充分性。旨在确定遵守法规要求的重要性以及不合规的后果。对违规行为分为6类进行讨论：1）与SD职责相关的违规行为；2）与质量保证部门（QAU）相关的违规行为；3）与员工资质和培训相关的违规行为；4）与研究动物/样本处理相关的违规行为；5）与SOP相关的违规行为；6）与研究记录和样本保存相关的违规行为。

在过去6年中，FDA共签发了8封警告信，具体如下：器械与放射健康中心（CDRH）签发的警告信数量最多，其次是生物制品评估与研究中心（CBER），最后是药品评估与研究中心（CDER），分别为5封、2封和1封。

在8封警告信中，共报告了67项来自不同类别的偏差。与QAU无法履行职责、文件记录、不符合研究方案、动物处理偏差以及最终研究报告中的数据记录相关的违规行为频率均为12%。与SD无法履行职责以及缺乏或不符合相关SOP的违规行为频率均为10%。研究人员资质不足以及样本/试剂和对照处理相关的违规行为频率分别为9%和6%。样本/记录保存相关的偏差频率最低，为5%。

 

 

与SD职责相关的违规行为

SD必须具备相应的教育背景、培训经历和经验，由设施管理层指定为每项非临床研究的唯一负责人。根据21 CFR第58部分第33节b款，SD负责研究的技术实施、招聘合格人员、数据记录、分析、解释和报告等职责。然而，评估的WL显示，许多SD未能履行其职责，导致不符合研究方案以及提交的最终报告存在缺陷。

例如，在2022年8月3日的警告信632,553中，研究设施将SD视为“按需”职位，而不是由QAU人员宣布的永久职位。SD最重要的职责是确保研究按照批准的研究方案/计划进行，任何变更都应由其预先批准（根据21 CFR第58部分G小节“非临床实验室研究的方案和实施”）。然而，在该警告信中，研究方案“动物福利监测”要求将动物患病、受伤、疼痛和痛苦的多种迹象通知SD和申办方监查员，但这一要求并未得到执行。此外，研究记录显示动物出现呕吐、行走时轻微弓背等异常情况，但这些内容并未包含在最终研究报告中。这些记录还揭示了样本质量差和组织收集不足等问题。

此外，GLP要求SD确保数据记录准确无误，所有数据输入必须在输入当天注明日期，并由输入数据的人员签名或盖章。任何对数据的修改都不得掩盖原始内容，必须说明修改的理由，并注明修改的日期、签名或标识。例如，在2024年9月10日的警告信SDWH-687,970中，研究方案要求报告体外细胞毒性测试的所有数据（每项测试的6个重复数据），并用于分析。然而，该测试的所有数据并未被报告或用于分析，且细胞活力计算的报告值也不准确。SD未能确认这些内容是否被记录，也未实施或记录任何纠正和预防措施。

GLP还要求在最终报告中记录并说明研究过程中出现的所有偏差或意外观察结果，这些结果可能会影响非临床实验室研究的数据完整性和质量，并详细解释可能导致这些偏差的所有因素（21 CFR第58部分G小节，第58.35节第6和7款以及第58.185节第8款）。例如，在2022年8月3日的警告信632,553中，研究记录显示动物日常临床观察中记录了“神经性抓挠”，但这些信息未包含在最终研究报告中。在2023年10月20日的警告信663,898中，部分动物的给药数据未在最终研究报告中得到充分展示，且一些表明某些动物活动增强的临床观察数据也未被准确记录。

 

与QAU相关的违规行为

在非临床研究设施中， QAU是最重要的部门之一，负责开展内部审计以评估对研究方案和内部程序的合规性，审查记录的数据，跟踪培训和完整的研究记录。如果没有足够的QAU监督，整个研究的可信度无法得到保证，申办方和FDA调查人员将需要更多的保证，以确保最终研究报告中记录的数据的准确性。QAU审计的充分记录可以确保设施、设备、人员、方法、实践、记录和控制符合FDA的GLP规则。

在2024年9月10日的警告信687,970中，设施管理层未能确保QAU的存在，如21 CFR第58.35节所述，即未能确保该部门报告的任何偏差通知到SD，也未能确保实施和记录纠正措施。在许多警告信中，QAU未能履行GLP要求的职责。例如，在2019年2月12日的警告信562,382中，发现实验动物的通气水平超过了实验设施兽医给出的说明中规定的最大量。QAU未能识别对研究动物进行麻醉的手术技术人员，也未能保持必要的潮气量范围。研究兽医未按照相关SOP对临床病理学数据进行评估。在同一封警告信中，QAU未审查最终研究报告。

同样，在2020年3月26日的警告信600,258中，手术和安乐死记录显示，实验室错误地记录了部分受试动物的数据，例如，将羊8（动物编号7182）的数据误写为羊8B（动物编号7215）在最终报告中。此外，实验室记录显示有15只羊出现了发热症状，但这些情况未被记录在最终报告中。在同一封警告信中，最终研究报告缺少QAU签署的声明。在同一封警告信中，QAU未能保留测试设施进行的非临床实验室研究的总时间表。

与员工资质和培训相关的违规行为

GLP要求设施管理层聘请足够合格的员工，以监督研究并执行研究方案分配的相关职责。根据21 CFR第58.29节a款，研究员工应通过教育、培训等具备相应的资质。此外，应定期或按需对员工进行GLP要求及其更新的培训，这些培训记录应保存在档案区，并可供检查。然而，多份WL显示，测试设施未能为参与或监督非临床实验室研究的每个人员最新的工作描述、经验和培训记录进行及时维护。

例如，在2022年8月3日的警告信632,553中，FDA检查期间未能提供任何针对特定研究方案的培训记录，这使得研究员工履行职责的能力受到质疑。而在2024年9月10日的警告信687,970中，培训文件未能证明研究员工接受过如何记录豚鼠皮肤致敏和皮内反应测试注射部位不良事件（如抓痕、感染）的培训。此外，与皮内反应测试相关的培训文件也未解释如何区分红斑和水肿评分，也未能证明研究员工能否使用Magnusson-Kligman量表对豚鼠皮肤致敏进行评分，以及对皮内反应测试的红斑和水肿进行评分。尽管公司回应中包括了修订后的SOP、员工培训材料以及参与评分的人员的培训和评估记录，但FDA认为这些纠正和预防措施不足，并要求采取有计划的预防措施。

同样，在2020年2月3日的警告信592,280中，FDA调查人员报告称，许多参与研究任务的员工未能更新其工作描述或培训记录。检查期间员工档案中仅有的文件是美国实验动物科学协会（AALAS）提供的基于网络的动物护理培训课程的结业证书和员工简历。因此，FDA要求更新参与或负责正在进行和即将进行研究的每个人的职位描述、培训记录和经验记录。同样，GLP要求个人理解其指定的职责，包括适当的记录，以确保数据的质量和完整性。例如，在2022年2月10日的警告信623,581中，观察到由于血浆体积问题导致的肾小球滤过率（GFR）和肾血流量（RBF）计算出现多处错误。这些错误数值还被进一步用于统计分析，并体现在最终总结报告中。

 

与SOP相关的违规行为

非临床研究的每个步骤都需要有适当的SOP，以确保研究中收集数据的完整性和质量，这些数据最终会体现在最终报告中。例如，从接收测试和对照材料，到它们的识别、储存、处理、混合和取样，再到动物房运营和动物相关操作，直至研究结束，都需要有相应的SOP。根据21 CFR第58.81节a款和第58.35节第5款，对已建立的SOP进行任何重大修改都必须经过SD的批准，并且所有原始数据中的偏差都必须被记录并说明理由。

在2024年9月10日的警告信687,970中，调查人员报告称，该公司需要有书面SOP，以确保研究中生成的数据的质量和完整性。尽管研究方案中没有包含关于血液采集的任何细节，但研究设施从实验现场的志愿者中采集了人血用于补体激活测试。FDA检查人员报告称，没有SOP规定血液采集的身体部位，也没有对血液捐献者的健康状况进行限制，这导致了该项测试不受控制。在同一封警告信中，也没有SOP描述对最终报告的授权变更和偏差以及SD的批准。此外，测试设施没有维护SOP更新的历史文件，也没有制定关于动物房准备、动物护理和实验系统观察的SOP，这导致了不受控制的结果，从而损害了研究中生成的数据的质量和完整性。

 

与研究动物/样本处理相关的违规行为

与动物处理相关的违规行为包括从接收时的不当隔离到标识不清晰以及缺乏符合兽医医疗实践的充分评估等，这些都可能影响最终报告中数据的准确性。例如，在2019年2月12日的警告信562,382和2024年9月10日的警告信687,111中，研究人员未能准确识别研究动物，未在动物饲养单元外提供所有要求的信息，引发了对动物是否被错误分配到研究或研究组的担忧。此外，未对动物饮用水进行污染物分析可能会干扰毒性测试，导致错误地认为测试物质引起了毒性问题，这可能会质疑GLP毒性测试和GLP安全研究的结果（21 CFR第58.90节）。

持续的动物护理应是研究的一部分，以帮助获得有效的结果。在2024年9月10日的警告信687,970中，检查人员报告称未对动物提供兽医护理和体检记录。FDA调查人员报告称，缺乏对麻醉动物在手术过程中生命体征（如体温、心率、心输出量、脉搏和适当通气等）的监测SOP，这些监测可以表明麻醉的充分性和氧合需求。这些违规行为使生成的数据的质量和完整性受到怀疑。此外，实验数据应正确输入并验证，包括所有输入和修改。在2022年8月3日的警告信632,553中，FDA检查人员注意到动物来源记录中预印的有效期被划掉并由SD更改，但未给出解释。

根据21 CFR第58.83节，多份警告信中报告了与试剂处理相关的违规行为。例如，在2024年9月10日的警告信687,111中，研究报告指出在MTT细胞毒性测试中使用的阴性对照是高密度聚乙烯（HDPE）。然而，该试剂不符合美国药典对高密度HDPE的标准。

 

与研究记录和样本保存相关的违规行为

GLP要求测试设施必须分配专门的存储/档案区域，以保留所有研究的原始数据、记录、样本和最终报告，以便在检查中能够检索、验证和重建研究事件（如21 CFR第58.51节所述）。研究相关记录包括所有原始数据、协议副本、最终研究报告副本、总时间表、QAU检查记录以及任何修订内容，此外还包括参与研究的员工相关的文件，如培训总结、经验、职位描述和雇佣记录（21 CFR第58.35节b和c款）。其他需要保留的记录包括记录研究中使用的仪器和设备的维护、校准、验证和确认的文件。湿样本（如组织样本）相对脆弱，在储存过程中可能会变化其稳定性和质量，应根据样本的质量保存尽可能长的时间。

需要注意的是，如果进行非临床测试的设施终止了一项研究，所有原始数据、文件和其他材料必须转移到委托方的档案中，并且必须以书面形式通知FDA。如果进行非临床测试的设施停止运营，本节所述的所有原始数据、文件和其他材料必须转移到委托方的研究档案中，并且必须以书面形式通知FDA。

然而，在2022年8月3日的警告信632,553中，FDA调查人员报告称，实验室动物麻醉记录的原始文件中，48只动物中有12只接受手术处理的动物的记录缺失，并且未能按照21 CFR第58.190(a)款的要求采取任何纠正和预防措施。同样的违规行为也出现在2024年9月10日的警告信687,970中，其中并非所有原始数据都被存档，只有部分吸光度数据被SD确证并提交到档案中。

 

FDA检查中发现的违规行为及CAPA的充分性

每次FDA检查后，检查结果都会告知设施管理层和SD，FDA工作人员会要求采取措施，以评估提交的最终研究报告的完整性和质量。设施对任何发出的FDA 483表或WL的回应，应详细书面说明所有实施的CAPA。

在评估的警告信中，所有设施都通过各种CAPA措施进行了回应，例如建立新的SOP、更新现行SOP、培训或再培训、招聘合格员工等。此外，当无法纠正任何偏差时，需要进行澄清，以评估对数据完整性的影响，由FDA决定是否接受这一措施。尽管测试设施在其回应信中提出了CAPA建议，但其中许多被FDA调查人员发现是不充分的。

另一方面，如果忽视警告信中提到的问题，FDA将根据GLP中的“测试设施的取消资格”（21 CFR第58部分K小节），在不通知被检查企业的情况下启动监管行动。

 

FDA警告信中学到了什么经验教训？

首先，要遵守GLP标准的根源：研究机构管理层愿意招聘合格的研究人员，从SD和QAU开始，并根据21 CFR第58.29节的要求，配备足够数量的受过培训的研究人员。GLP标准的实施需要严格遵守研究方案、适用的SOP以及21 CFR第58部分中详细规定的法规。

其次，需要建立良好的文件管理实践（GDP）：随着计算机程序和数据库建设的进步，GDP的出现有助于遵守GLP标准。GDP主要通过在适用的记录簿、表格和清单中及时记录数据来确保数据的准确记录。数据的完整性和质量可以通过及时记录、标记/日期标注、主管/同事的核查以及最终的QAU审核来维护。修改记录时，必须采用特定程序，包括清晰划掉原始数据，注明修改的姓名首字母，并记录日期和时间（以及修改的原因）。同样，对于偏离研究方案或SOP的情况，应进行充分的调查和合理解释。

最后，利用专业软件和数据库：在设施中使用专业软件和数据库可以方便地跟踪记录、样本和处理过程。例如，可以使用定期培训数据库来跟踪任何员工的培训记录，每次培训完成后进行记录。可以使用数据库或卡片来管理档案/存储区域的交易，以便跟踪记录/样本的位置。同样，可以使用定期质量保证内部审核的软件，以确保按照审核日期进行审核，并跟踪偏差和发现的问题。此外，还可以使用数据库和条形码来记录动物到达、识别、分配到指定的测试或对照项目以及它们在研究中的命运等。

如下图所示。