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给小鼠接种肿瘤细胞如何高效成瘤

嘉峪检测网 2024-10-15 08:37

导读:本文介绍了给小鼠接种肿瘤细胞如何高效成瘤。

一、肿瘤细胞的准备

 

1、细胞株选择

 

选择适合的肿瘤细胞株,如乳腺癌细胞、肺癌细胞或结直肠癌细胞等,确保这些细胞株在小鼠模型中已被验证能够成瘤。

 

2、细胞的活力和状态

 

确保接种的肿瘤细胞具有高活力和良好的生长状态。在接种前,通过细胞计数、台盼蓝染色等方法评估细胞的存活率,一般来说,存活率应在90%以上。如果细胞存活率较低,可能会导致接种后成瘤效率降低甚至不成瘤。

 

3、细胞的浓度

 

选择合适的细胞浓度进行接种。通常,每只小鼠的接种量在1×10⁶至1×10⁷个细胞之间,但具体浓度可能因肿瘤细胞类型和实验目的而异。某些恶性程度较高的肿瘤细胞可能在较低浓度下就能成瘤,而一些生长较为缓慢的细胞可能需要更高的浓度,如某些低度恶性的甲状腺肿瘤细胞、部分前列腺癌的肿瘤细胞等。

 

4、细胞的培养条件

 

维持肿瘤细胞在适宜的培养条件下生长,包括培养基的成分、温度、CO₂浓度等。

 

二、小鼠的选择和准备

 

1、品系

 

不同品系的小鼠对肿瘤细胞的敏感性可能不同。常用的小鼠品系如BALB/c、C57BL/6等,根据肿瘤细胞株的特点选择免疫缺陷或免疫健全的小鼠品系。如BALB/c 小鼠在乳腺癌模型中可能更容易成瘤。

 

2、年龄和性别

 

一般选择6-8周龄的小鼠,雌性或雄性均可,但要保持实验中性别和年龄的一致性。

 

老年小鼠的免疫系统可能相对较弱,对肿瘤细胞的抵抗力也会有所不同。

 

3、免疫状态

 

如果需要研究免疫相关的肿瘤发生机制,可以选择免疫健全的小鼠;如果要排除免疫系统的影响,可以使用免疫缺陷小鼠,如裸鼠或NOD/SCID小鼠。

 

4、小鼠的健康状况

 

确保小鼠健康,无感染和其他疾病,以免影响肿瘤细胞的接种和生长。

 

5、小鼠环境准备

 

在接种前将小鼠适应实验环境,确保环境温度、湿度和光照等条件适宜。

 

三、接种方法

 

1、皮下接种

 

这是最常见的接种方法之一,操作简单且肿瘤易于测量。在小鼠的侧腹或背部皮下注射肿瘤细胞悬液,注射时要注意避免注入血管。

 

方法:先固定小鼠,右手持注射器,使针头与小鼠皮肤呈约45度角刺入皮下,当针头进入皮下后,会感到阻力减小,此时轻轻推动注射器活塞,将肿瘤细胞悬液缓慢注入皮下,一般注射量为0.1-0.2mL左右,具体根据实验要求调整,注射完毕后,轻轻拔出针头,用酒精棉球再次擦拭注射部位,防止感染。

 

2、原位接种

 

根据肿瘤的类型,选择相应的器官进行原位接种,如肺癌细胞可以接种到肺,乳腺癌细胞可以接种到乳腺。这种方法更能模拟肿瘤在体内的自然生长环境,但操作难度相对较高。

 

3、尾静脉注射

 

用于建立转移模型,将肿瘤细胞注射至小鼠尾静脉,观察肿瘤细胞的血液传播和转移。

 

四、接种后的护理和观察

 

1、观察小鼠的健康状况

 

每天观察小鼠的饮食、饮水、活动情况、体重变化等,及时发现异常。

 

2、测量肿瘤大小

 

定期使用游标卡尺测量皮下肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积。 

 

如图为不同处理组皮下成瘤实验结果图。

 

五、注意事项

 

1、必要时可对小鼠进行麻醉,以减少痛苦和应激反应。常用异氟烷或戊巴比妥钠麻醉。

 

2、细胞注射:使用无菌注射器和细针头(如26G或27G),将肿瘤细胞悬液缓慢注射至预定部位。皮下接种时,注射时注意避免过深或过浅,以确保细胞位于皮下组织中。

 

3、确保所有操作都在无菌条件下进行,减少细菌感染的风险。接种时肿瘤细胞的状态直接影响成瘤效率,细胞应处于活跃增殖期。小鼠的个体差异可能会影响实验结果,尽可能保证实验的同质性。

 

总之,要高效地给小鼠接种肿瘤细胞成瘤,需要综合考虑肿瘤细胞的质量、小鼠的选择和接种方法等多个因素,并在实验过程中进行精心的护理和观察。

 

 

 

来源:实验老司机

关键词: 小鼠接种

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