1. 实验原理

 

小鼠心脏灌流实验是通过血液循环系统将固定液或生理盐水注入体循环，以清除血液并固定组织的实验方法。这种方法可以有效去除血液对后续实验（如组织切片、免疫染色、基因测序等）的干扰，同时保持组织的形态和结构。

 

2. 实验材料

 

耗材：1 mL注射器、 输液器针头、止血钳、镊子、剪刀、导管、解剖工具（如眼科镊、精细剪等）

 

试剂：生理盐水、固定液（4%多聚甲醛）、麻醉剂（三溴乙醇）

 

设备：蠕动泵、解剖台

 

3 实验步骤

 

实验流程：麻醉小鼠→固定小鼠→打开胸腔→生理盐水灌流→固定液灌流→组织取材

 

3.1 麻醉小鼠

 

量小鼠体重，按0.2 mL/10 g注射三溴乙醇（1.25%），一般一只小鼠0.6 mL左右，通常在5 min内完全麻醉，麻醉效果可维持30 min。

 

3.2 固定小鼠

 

确认小鼠进入深度麻醉状态（捏尾尖或脚趾无反应），将小鼠四肢（掌根、脚跟）固定在解剖台上，注意固定紧实，不然小鼠剧烈挣扎容易松动。

 

3.3 打开胸腔

 

打湿腹部毛发，用镊子提起腹部的皮毛，用剪刀剪开腹部（注意不要剪到器和肠道），剪开横隔膜（避免剪到肺脏），剪断肋骨，充分暴露心脏。

 

3.4 生理盐水灌流

 

剪开右心耳，输液器针头从心尖刺入左心室， 以15 mL/min的流速灌注生理盐水，持续约3 min。

 

3.5 固定液灌流

 

观察肝脏、爪子是否变白，若变白表示血液已清除，再灌流生理盐水1 min左右更换固定液（4%多聚甲醛）。以大约10 mL/min的速度灌注固定液，持续约5 min。观察小鼠肌肉收缩、尾巴摆动等现象，若观察到肌肉收缩、尾巴摆动就表示灌流环路是畅通的。

 

3.6 组织取材

 

等待小鼠肝脏和四肢变硬后表示灌流完成，小心剪取需要的组织，若表面有残留的血液，用生理盐水冲洗干净，之后转移到固定液（4%多聚甲醛）中，建议保存时间不要超过1周，避免后续实验组织自发荧光增强。

 

4. 注意事项

 

进针方向，在左心室进针时，需确保针头进入左心室而非右心室，避免刺穿心室间隔。

 

灌流速度，灌流速度不宜过快，以免灌流液进入肺脏。

 

组织保存，灌流后的组织需及时放入4℃固定液中保存，防止组织降解。

 

注意是要进行体循环，肺循环会导致血液在体内的残留，没有体循环效果好。

 

附：体循环路径：左心室 →主动脉→全身各级动脉→毛细血管网→各级静脉→上、下腔静脉→右心房

 

肺循环路径：右心室→肺动脉→肺部毛细血管网→肺静脉→左心房

 

5. 参考资料

 

[1] 黄维,杨晓兰,马育,等.交联琼脂包嵌凹凸棒微囊重复大鼠血液灌流中生物相容性的初探[J].第三军医大学学报,2003,(12):1079-1081.

 

[2] Rana A, Massa PT, Chen XJ. A Gravity-Fed Transcardial Perfusion Method for Histologic Analysis of the Mouse Central Nervous System. J Vis Exp. 2022;(179):10.3791/63386.

 

 

 

来源：实验老司机

关键词： 心脏灌流实验