1. 前言

 

记住，没有样本的实验室毫无意义！

 

除了细胞以外，蛋白质也是生物样本的主力。尤其是很多课题对蛋白质的生物活性具有很高的要求，肽链没破坏但三四级结构损坏了，一样做不出结果。

 

以下将介绍三点蛋白质样本的保存思路。

 

2. 低温保存

 

蛋白质，尤其是酶，是非常脆的，稍微偏离一点体温活性就会大打折扣，通常超过40℃就会失活。所以冷藏一般是短时间保存的必要手段。

 

如果放在常用的4℃冰箱，一定要在一周内用完；如果需长期保存，通常要保存于–20 ~ 5℃ ，如能在-70℃下保存当然最好。

 

因此需反复强调一点：按后续实验用量分装保存于适当温度，一次取出立刻用完，避免反复冻融。

 

但是！有少数酶对低温敏感，如鸟苷丙酮酸羧化酶在25℃时性质稳定，低温下反而失活；过氧化氢酶要在0~4℃保存，如果冰冻反而失活；羧肽酶反复冻融会失活等。这些需要同学们事先去相关数据库检索确认。

 

此外还有一点debuff：蛋白质和酶越纯越不稳定，溶液状态比固态更不稳定，因此还需要其它手段。

 

3. 脱水，以干粉或结晶状态保存

 

正如上一段所说：蛋白质和酶以固态存在比溶液要稳定得多。这就是为什么实验室常备冻干机器。

 

通过冷冻干燥、真空干燥等手段将蛋白质样本制成固态干粉制剂放在干燥剂中，可在低温下长期保存超过一年。

 

以固态保存在于尽可能抑制游离水造成的化学反应与微生物活动：

 

● 抑制微生物活性，含水量应小于10% ；

 

● 抑制化学活性，含水量应小于3%。

 

此外要特别注意酶在冻干时往往会部分失活。

 

4. 使用保护剂保存

 

我们在培养细胞时会添加血清，各种反应体系需要添加buffer，自然的生物体内也具有精密的稳态环境，模拟这一稳态环境也可以长期保存蛋白质的活性，或者说自然功能。

 

● 惰性有机物：如糖类、脂肪酸、牛血清清蛋白、氨基酸、多元醇等，以保持稳定的疏水环境；

 

● 中性盐：有一些蛋白质要求在高离子强度（1 ~ 4 mol/L或饱和的盐溶液）的极性环境中才能保持活性。常用MgSO4，NaCl、(NH4)2SO4。等。以此方式保存的蛋白质在后续使用时要先进行脱盐工序；

 

● 巯基试剂：一些蛋白质和酶的表面或内部含有半胱氨酸巯基，易被空气中的氧缓慢氧化为磺酸或二硫化物而变性。如谷胱甘肽等蛋白是生物体内重要的还原剂，其还原性也是分子生物学的研究对象。为保持这一类蛋白的还原能力，保存时可加人半胱氨酸或巯基乙醇，起到一个替罪羊的作用，代替蛋白质自身被氧化。

 

5. 参考文献

 

[1] 张建社，褚武英，陈韬，2009，蛋白质分离与纯化技术，军事医学科学出版社

来源：实验老司机

关键词： 蛋白质 酶