色谱分析技术是药品质量控制的核心手段，其方法有效性依赖于系统适用性测试（System Suitability Test, SST）的严格实施。峰谷比（Peak-to-Valley Ratio, p/v）作为关键系统适用性参数之一，直接反映色谱峰间的分离效能，尤其适用于相邻峰无法完全基线分离时的干扰评估。中国药典2025年版进一步细化了峰谷比的应用要求，强调其与测量准确度的关联性。本文结合国内外药典与专业文献，系统阐述峰谷比的定义、计算方法及可接受值确定逻辑。

 

一、峰谷比的定义与计算方法

 

峰谷比定义为小峰平行外推基线的高度（Hp）与小峰和大峰间曲线最低点平行外推基线的高度（Hv），计算公式为：p/v =Hp/Hv

 

 

由公式可知，当两峰完全分离时，Hv趋近于基线噪声，峰谷比趋于无穷大；随着峰重叠加剧，Hv增大，p/v值降低，提示分离度不足可能导致积分误差。

 

二、峰谷比与分离度（Rs）的关系

 

峰谷比与分离度存在非线性关联。当Rs≥1.5时，峰间可达基线分离，无需计算峰谷比（计算结果无指导意义）；而1.0<Rs<1.5时，则可需通过峰谷比进一步评估干扰程度（USP <621>），中国药典2025年版则延续了此原则，并强化了峰谷比与定量准确度要求的直接关联。

 

三、药典2025年版对峰谷比的新要求

 

相较于2020年版，中国药典2025年版在通则0512下“系统适用性试验”中新增了以下内容：

 

1、干扰程度的评价：要求通过峰谷比评估相邻峰对目标成分定量的干扰，明确在确定该项系统适用性要求时，需要评价峰间干扰程度（定量化），即到底影响多少。

 

2、准确度的验证：峰谷比可接受值需还通过实验验证，确保在最大允许干扰下，测量误差符合相应检测目的的要求。

 

3、可接受值需明确规定：应在品种项下规定明确的可接受值。

 

四、峰谷比可接受值确定的思路

 

1、数学模型模拟：如通过数学模型计算，当峰谷比≥2.0时，主峰面积的积分误差可控制在约±3%以内，但需满足以下条件：

 

a.峰形接近正态分布；

 

b.相邻峰高度差异不超过50%；

 

c.基线噪声水平较低（信噪比≥20）。

 

2、干扰模拟实验：通过设计含有不同浓度梯度相邻峰的样品，测定其峰谷比与积分误差的关系。例如，在主峰LOQ水平下，逐步增加相邻峰浓度（如增加值限度浓度），记录峰谷比变化及主峰面积偏差。此种方法实际上可以较为准确的评估出可接受值。

 

此外还有动态阈值调整等方法也可以辅助确定合理的峰谷比。

 

五、应用案例

 

案例1：化学药中异构体分离

 

某API合成中产生0.1%的异构体杂质，色谱分离度Rs=1.2，峰谷比=2.0。杂质定量误差一般需≤10%。实验显示，当峰谷比=2.0时，异构体面积积分偏差为8%，符合要求，故设定p/v≥2.0为可接受标准。

 

案例2：某化药有关物质分离

 

某复方制剂中两个相邻成分浓度差异达10倍，峰谷比=1.5时，通过干扰模拟实验发现低浓度成分积分误差超15%。通过调整流动相梯度，将峰谷比提升至2.2，积分误差降至5%左右，满足准确度要求，故设定p/v≥2.2为可接受标准。

 

六、结论与展望

 

中国药典2025年版对峰谷比要求的升级，与USP、EP接轨，体现了“质量源于设计”（QbD）理念在色谱方法开发中的深化。通过将峰谷比与定量准确度动态关联，既避免了过度追求高分离度的资源浪费，又确保了关键质量属性的可控性。

来源：药知晓

关键词： 峰谷比