Q：臭氧空间消毒，如果开展生物指示剂挑战，一般如何操作？

 

A：目前合适挑战臭氧的我们微穹的生物指示剂是3次方的萎缩芽孢杆菌，但是臭氧要干掉3log难度太大，所以一部分用户是除菌后，再做芽孢计数，看具体下降了几个log。因为臭氧消毒能力比较弱，尤其除芽孢的能力更弱，所以建议可以采用国标GB28232-2020当中的要求，挑战白色葡萄球菌（8032）3个log值，就可符合臭氧消毒要求。

 

Q：一般空间消毒15ppm时用指示剂并不能完全杀灭，如何判断杀灭情况？

 

A：如果是臭氧，那么不能完全杀灭，可以做除菌后的芽孢计数，看具体下降了几个log，是否符合自身的除菌能力要求。

 

Q：nf的安全边界如何理解？

 

A：化学药品注射剂灭菌和无菌工艺研究验证指导原则-试行版当中规定，“一般在灭菌验证时，要求灭菌后所有生物指示剂为阴性结果，则非无菌概率值NF实际能够达到

 

10-1-10-2，甚至更低，为了增加灭菌保障的安全边际，一般取NF=1，即lgNF=0”。

 

所以这里增加了灭菌安全边际之后，最后求得的N0值会比较高，这样将更高的N0值的生物指示剂灭过，更能说明灭菌效果，这里的灭菌安全边际指的是这层意义。

 

（但是就实际应用来说，我们认为指导原则当中的这句话，有失偏颇，暂时保留我们的意见，有需要再进一步沟通。）

 

Q：D值会在储存运输期间产生波动么？

 

A：路上运输一般为2-3天，短时间内对D值不会有影响。而在储存期内，随着时间的推移，一个月，半年，甚至一年，D值会有下降的趋势。在有效期内，D值的波动在我们的有效控制范围内。

 

Q：灭菌过程不能做到100%恒温，那这样是不是代表Z值都在变化？

 

A：Z值是多少，是跟购买的该批次的生物指示剂直接相关，而跟温度波动无关。只是说Z值的高低，会对不同的温度下的该生物指示剂的D值有所影响。

 

具体的影响方式，参考如下的公式：DT=D121/10(T – 121) / Z。

 

Q：运输过程的温度及其他因素会导致到货的指示剂D值和说明书标示不一样吗？

 

A：运输过程短暂影响不明显，储存时的温湿度对生物指示剂会产生影响，尤其是一些特殊的生物指示剂，比如过氧化氢生物指示剂，对储存的温度和湿度特别敏感，必须严格按照厂家规定的温湿度下保存。

 

Q：产品和BI灭菌后，做BI灭菌效果评价，请问BI灭菌后可以放多久，再做BI的培养？

 

A：USP55中有所规定，在4个小时内转移到培养基当中做生物指示剂的培养。因为生物指示剂被灭菌挑战后，芽孢有可能是处于受损状态，尽快转移培养才能避免假阴性的风险。

 

Q：BI灭菌后可以放5天再去做BI培养吗？灭菌后的BI需要放冰箱吗？

 

A：不可以，按USP55中规定，要在4个小时内转移培养。灭菌后的BI应及时转移培养，而不是再放回冰箱。

 

Q：BI已确定，对应的BI的D值和N0初始菌数已定，那么在进行F0＞Fbio判断时，Fbio计算中的NF如何确定？有10的0次方、-2次方、-6次方等。

 

A：首先理解NF的意义，代表的是残存芽孢数或者非无菌概率值。如果一个BI灭菌结束后，是有残存芽孢的，那么做残存的芽孢计数，NF就是计数结果这个数值。当然更多的应用是NF看做非无菌概率值，所以只有多个BI被灭菌，同时有阴性又有阳性，自然就可以知道非无菌概率值NF为多少

 

这里有一条非常实用的公式给到我们计算，NF=ln（n/r），ln为自然对数，n为BI的总数，r为被灭成阴性的BI数量。如题所问，NF到底为100、10-2、还是10-6，这只是对BI被灭菌后非无菌概率值的预估，一般要保证BI被灭成阴性，那么NF取到10-2为宜。

 

Q： 实验室里BI除做孢子数计数，还需要纯度和鉴定吗？

 

A：建议除了做孢子计数复核外，可以看一下存活时间和杀灭时间，来间接核实一下D值的可靠程度。至于纯度和菌种鉴定，我们作为生产厂家已经做了此项工作，可以对我们微穹实验室做审计来确认。如果另外再自己做这方面的复核，增加了自己的负担，并不建议做。

 

Q：生物指示剂经过过度杀灭法后观察颜色，生物指示剂有点位未变色是什么原因？对应点位的保温时间及F0值合格。

 

A：如果指的是化学指示剂，过度杀灭后，化学指示剂有些未变色，这是用来评估温度分布的均匀程度，对应点位的F值都能达标，而且温度探头已校准过是没问题的，那么可以推断化学指示剂本身有些难以变色，这里不深究。

 

如果问的是生物指示剂，那么培养后未变色，代表的是生物指示剂挑战灭菌为阴性，这是一个正常的现象。

 

Q：生物指示剂从冰箱拿出来保存时间有做过验证吗，一般能保存多长时间？

 

A：同类型的生物指示剂受温度、湿度的影响也不同，我们仅仅做了在规定的保存条件下生物指示剂相应的数据稳定性的测试，如果脱离保存条件，不好评估能保存多久，需要长时间的监测来得出可靠的数据。

 

Q：BI灭菌后培养时，需要放置一支阳性对照共同培养，有时不能一天内全部做完，需要间隔1、2天，需要每次培养都要附带阳性对照吗？

 

A：一般来说同一批次的BI做一次阳性监测即可，阳性对照的目的是说明芽孢在该培养基当中在规定的温度下是可以生长出来的。其他时间段做的验证也是同一批次的BI，可以不需要做阳性对照。

 

Q：审评老师经常会问生物指示剂D值和孢子量应符合灭菌验证指导原则，按指导原则 一般NF=1，此种情况下，BI灭菌后可否放冰箱后12h再培养？

 

A：BI灭菌后USP55中，要求是4个小时内转移培养，所以并不建议放置12小时后再培养。（详细解答可看第3问）

 

Q：D值的测试责任属于谁？内部确认时怎么从侧面证明？除了存活时间杀灭时间的计算。

 

A：D值作为BI的一项重要质量参数，按道理来说，理应要做复核，但是D值的检测需要用到抗力仪，有条件的是可以进行复核的，没有条件目前也只能用存活时间和杀灭时间来做确认，间接复核D值的准确性，并没有其他更好的方法。

 

Q：最大存活时间是否可以做为不同灭菌工艺（比如F0≥8）用生物指示剂的选择依据？

 

A：根据不同的灭菌工艺选择生物指示剂时，如何选取一个合理的D值的BI，应该要根据该灭菌工艺一个灭菌循环下来最低点的累加物理F值来决定。最大存活时间可以拿来跟实际的物理F值做对比，可以大致看出我选择的BI在该灭菌工艺条件下，被杀灭的可能性有多少。

 

 

来源：Internet

关键词： 生物指示剂