1.概述

 

国家药品监督管理局食品药品审核查验中心（CFDI）于2025.1.17发布《清洁验证技术指南》，该指南详细描述了清洁验证执行过程中的各项要求，以指导和规范药品上市许可持有人、药品生产企业（包括原料药登记人）等对药品生产设备及部件的清洁验证进行科学管理，确保患者用药安全。确定设备清洁后残留物是否达到规定的限度要求，离不开建立准确可靠的残留物分析方法对残留物进行检验。笔者已在《清洁验证后残留物分析方法开发与验证要点》一文中详细论述了如何进行残留物分析方法开发与验证，而确定残留物限度是建立分析方法的前提和必要依据，也是清洁验证的一项重点，本文笔者将全面介绍清洁验证后残留物限度计算方式，以便为广大研究者提供参考。

 

2.残留物限度计算方式

 

残留物限度关系到清洁验证的科学性和合理性，以及清洁方法的有效性。因此各个企业应当根据其生产设备和产品的实际情况，制定科学合理、能够实现且能通过适当的方法检验的限度标准。普遍接受的可接受标准限度计算方式有以下几种。

 

2.1 以目视检查为依据的限度

 

目视检查是清洁验证限度的首要可接受标准，但通常不能作为单一可接受标准使用。目视检查方法是确认残留去除的直观方法，观察时应考虑目视检查表面位置与特性、环境照度、观测的距离、观测角度以及观测人员的视力等情况，确保目视检查效果。同时，建议考虑使用内窥镜、相机或摄像头等技术手段增加目视检查的可靠程度。需要目视检查的表面应为干燥表面，如无法干燥，应说明理由。目视检查标准为无可见残留物。显然目视检查无法对可溶性残留物是否达到清洁要求进行判定，通常作为辅助的可接受标准。

 

2.2 基于残留物浓度传统默认值

 

标准：一般残留物浓度限度为十万分之一（10ppm）。

 

计算方法：通用限度为10ppm时

 

式中：

 

MACO：最大允许残留总量，单位mg或者ml;

 

MBS：下一产品的最小批量，单位mg或者ml。

 

计算出MACO值后，进一步计算擦拭样品或淋洗样品中的残留限度：

 

擦拭样品残留限度（L）计算：

 

淋洗样品残留限度（L）计算：

对于中药前处理、原料药粗品制备、生物制品上游发酵等工序限度可适当放宽至50ppm或100ppm，或者基于风险确认合理的限度范围。

 

2.3 基于药物活性成分治疗剂量

 

标准：药物残留限度为上批产品活性成分的最低日治疗剂量的1/1000。

 

计算方法：

 

式中：

 

MACO：最大允许残留总量，单位mg或者ml；

 

MDD：上一产品活性成分最低日治疗剂量，单位mg/天或者ml/天;

 

MBS：下一产品的最小批量，单位mg或者ml；

 

SF：安全系数，SF 通常设置为1000；

 

LDD：下一产品每日最大使用剂量（注：剂量包含处方中的所有量而不仅仅是活性成分，单位和批量保持一致），单位mg/天或者ml/天。

 

计算出MACO值后，可分别通过公式（2）和（3）进一步计算出擦拭样品和淋洗样品中的残留限度。但是，此计算方法应当在同等用药周期基础上进行两个产品的比较，残留限度通常设为最低日治疗剂量的1/1000，对于一些风险较高的化学物质也可选择更加安全的系数，如最低日治疗剂量的1/10000。

 

2.4 基于健康的暴露限度（HBEL）

 

基于健康的暴露限度（HBEL）可接受标准通常为每日允许暴露量（PDE）或每日可接受暴露量（ADE），使用单位mg/天。PDE/ADE 值是由有资质的毒理学家等按照体重和不同调整因子估算，由大多数相关动物研究中的无可见作用水平（NOEL）、无可见有害作用水平（NOAEL）或观察到作用的最低水平（LOEL）、观察到有害作用的最低水平（LOAEL）等得出。

 

 

式中：

 

PoD：起始点，推荐首选NOEL，如果没有NOEL，可用NOAEL、LOEL、LOAEL 等；

 

体重调整系数：假设任意男女成人体重为50kg，以提供额外的安全系数；

 

F1-F5：调整因子，以计入不确定度；

 

UFc：组分不确定因子，反映单个变量之间、不同品种差异、亚急性折算为急性外推、LOEL 折算为NOEL 外推、数据完整性等补偿因素的综合系数；

 

MF：修正因子，用于表达未被其它因子覆盖的不确定因素；

 

PK：药动学调整。

 

NOEL的数值可通过下式计算得到：                  

 

式中：

 

LD50：被清洁物质的半致死量，可通过查询PubChem网站得到数值，单位为mg/kg;

 

2000：经验常数。

 

计算出PDE/ADE 值后，进一步计算残留限度：

 

式中：

 

MACO：最大允许残留总量，单位为mg;

 

MBS：下一产品的最小批量，单位为mg或者ml；

 

LDD：下一产品每日最大使用剂量，单位mg/天或者ml/天。

 

计算出MACO 值后，可分别通过公式（2）和（3）进一步计算擦拭样品和淋洗样品中的残留限度。

 

基于健康的暴露限度（HBEL）相较于传统方法（如1/1000最低日治疗剂量、10ppm等）设定的限度，其可接受标准在评估清洁残留数据时在科学性方面更具优势，但因其数据来源不同、计算因子赋值不够明确等原因，又有一定的不确切性。一般来说，当基于毒理学计算的残留限度值低于传统限值时，应采用基于毒理学计算的残留限度值；当毒理学计算的残留限度值高于传统限值时，可选择继续采用传统限值，也可经足够科学的风险评估后，采取毒理学计算的残留限度值，企业可结合历史数据将传统限值设为警戒限。

 

2.5 专用设备（组件）限度的计算

 

专用设备组（组件）交叉污染的风险很低，但需考虑到降解产物、清洁剂和生物负载（如适用）等其他残留的影响。相对于共用设备，活性成分在专用设备中的残留限度可适当放宽，通常可基于风险设定一个标准，如限度设为前一批次产品在下一批次产品中残留量不超过1/1000；如果设备组中有一部分专用于一个产品，那么在计算活性成分残留限度时，应当分别考虑专用和共用表面积。专用设备（组件）清洁剂残留限度的计算可参考共用设备清洁剂的残留限度的计算方法。专用设备组（组件）残留物限度的计算可参考2.2-2.4章节介绍的三种方法进行。

 

2.6 中药制剂限度的计算

 

基于中药产品成分复杂、单一指标成分低等的特殊性，应当评估确定指标成分作为残留标记物或选择非专属性方法，相互结合进行验证。

 

对于处方中含有某些毒性较大饮片的产品，其毒性成分残留应当基于现代科学，选择合适的残留标记物，并充分考虑安全性，确定其残留限度。

 

对于处方中含有矿物类或其他含重金属中药材的产品，需科学评估对后续产品影响，如检测以毒理学数据为基础，结合残留物的暴露情况和临床用药剂量，确定重金属及有害元素残留限度。

 

需要注意的是，含有某些毒性较大饮片的产品如不能使用专用设备，其毒性成分残留与组内清洁最差产品残留均需考虑。

 

中药制剂限度的计算同样可参考2.2-2.4章节介绍的三种方法进行。

 

2.7 生物制品限度的计算

 

生物制品的清洁过程通常是将产品接触的设备表面暴露于极端pH和/或加热条件下，此时活性成分会发生降解和变性，并可能变得无药理活性，因此基于毒理学的评估来设定产品残留限度可能不再适用。活性成分的降解和失活情况可以在实验研究中证实，如果研究数据表明活性成分未完全降解或失活，仍需要使用基于健康的暴露限度（HBEL）来计算活性成分的残留限度。

 

对于抗体偶联药物（ADC）等产品，除关注生物活性成分的残留，还要考虑所偶联的小分子等其他药物的残留，其限度计算方式可参照化学药品所用的方法，即2.2-2.4章节介绍的三种方法。

 

2.8 微生物和细菌内毒素限度

 

微生物和细菌内毒素限度的确定与活性成分、清洁剂等残留物有较大差异：对于非无菌生产，可将下一个产品的微生物限度标准作为可接受水平。基于微生物的其他来源（如来自下一产品的原料）、下一产品特性对微生物的影响、清洁效期内影响微生物增殖的其他因素等，通常采用安全因子对产品标准进行调整，以使微生物可接受残留水平更为严谨。一般的微生物限度，如擦拭取样法采用1-2cfu/cm2，通常取样面积25cm2，其淋洗取样法采用纯化水限度100cfu/ml。值得注意的是，当下一产品的微生物限度较严时，应当使用下一产品的微生物限度进行控制，或者经评估不低于取样环境级别微生物的要求；采用注射用水淋洗取样时一般限度设定为10cfu/100ml，也可采用其他经评估的限度值或者采用活性物质残留计算方法确定微生物限度。

 

对于有细菌内毒素限度要求的产品，通常检测最终淋洗水，其限度可采用注射用水标准（0.25EU/mL）。对于使用革兰氏阴性细菌（如大肠杆菌）发酵的生物制品，在发酵和收获步骤可不进行细菌内毒素限度设置，或者设置更高的细菌内毒素限度，如5-25EU/mL。

 

3.结语

 

本文笔者以《清洁验证技术指南》为基础，总结了八种清洁验证后残留物限度计算方式，其中主要方式为2.2-2.4章节介绍的3种—基于传统默认值、基于活性成分治疗剂量和基于健康的暴露限度，基于传统默认值和基于健康暴露限度这两种方式普适性较强，几乎适用于所有类型残留物，包括活性成分、清洁剂、辅料、中间体，基于活性成分治疗剂量仅适用于活性成分残留物限度计算。以上三种计算方式可以联合使用，如果3种方式的计算结果不同，则应该取3种方式计算中的最小值作为残留量的标准；目视检查法确定的限度通常只作为辅助可接受标准，不作为唯一标准；专用设备（组件）、中药制剂和生物制品的限度确定各自有其特殊之处，但是计算方式仍以2.2-2.4章节介绍的3种为基础；微生物和细菌内毒素限度可直接引用已有的数值进行确定。

来源：注册圈

关键词： 清洁验证